摘要：蜂膠中含有很多的黃酮苷類物質(zhì)，而黃酮苷類物質(zhì)由于自身的抗氧化性能和在人體不能被充分利用使其抗氧化活性沒有黃酮苷元的抗氧化活性強。探討酶法降解黃酮苷的研究現(xiàn)狀和在蜂膠加工中應(yīng)用的可能性，得出結(jié)論，酶法降解蜂膠中的黃酮苷能夠顯著增強蜂膠的抗氧化活性，能夠為蜂膠更深層次的利用奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：蜂膠；黃酮苷；酶解；抗氧化活性

蜂膠是蜜蜂從植物芽苞及樹干上采集的樹膠。并混入蜜蜂上顎腺分泌物和蜂蠟等加工而成的一種具有芳香氣味的膠狀固體物，其中發(fā)揮重要作用的生物活性物質(zhì)是黃酮類化合物。黃酮類化合物廣泛分布于植物中，人們發(fā)現(xiàn)有生物功效的黃酮類化合物有500余種，它們大多以黃酮昔的形式存在，其中約有一半是β-葡萄糖昔，如銀杏黃酮、大豆異黃酮等，它們對人體健康發(fā)揮了非常大的作用。

黃酮類化合物，一般是由兩個苯環(huán)通過中央三碳鏈相互連接而成的具有C6-C3-C6基本碳骨架的系列化合物，根據(jù)官能團和取代的位置不同，可以將黃酮類化合物分為黃酮、黃酮醇、雙氫黃酮、雙氫黃酮醇、異黃酮、雙氫異黃酮等幾種類型，一些黃酮類化合物結(jié)構(gòu)上的-OH與糖苷元結(jié)合生成黃酮苦，例如蜂膠中的蘆丁就是由槲皮素與芳香糖結(jié)合而生成的。由于黃酮苷類化合物結(jié)構(gòu)上的差異與人體較低的吸收能力，使其抗氧化活性比黃酮苦元低很多。

吳谷平研究發(fā)現(xiàn)，將蜂膠經(jīng)過硅膠吸附分離后得到四個組分，組分IV中的總黃酮含量相對高于組分I，II，III，其主要成分就是黃酮苷類物質(zhì)，因此黃酮苷在蜂膠中的含量是比較高的。由于現(xiàn)在的檢測方法對于分子量比較大的黃酮苷類物質(zhì)不能夠完全被檢測出來，在經(jīng)過質(zhì)譜電離形成離子碎片后，黃酮苷往往只能檢測到形成黃酮苷的苷元，而液相色譜因為對照品的限制只能檢測到少數(shù)一兩種含量較高的黃酮苷，所以蜂膠中黃酮苷類物質(zhì)的含量一直沒有過準(zhǔn)確的報道。我們以蜂膠中比較典型存在的兩種苷元與黃酮苷槲皮素和蘆丁為例進行探討。

1 械皮素與蘆丁抗氧化性能的探討

1.1 槲皮素與蘆丁的抗氧化理論

槲皮素與蘆丁在結(jié)構(gòu)上的差異：它們都是由基本母核2-苯基色原酮構(gòu)成，槲皮素在3，5，7，3’，4’位置上存在著5個酚羥基，因此稱之為3，5，7，3’，4’-五羥基黃酮；而蘆丁由于其苷元槲皮素的3-OH被苷香糖取代成為糖苷，因此被成為3，5，7，3’，4’-五羥基黃酮醇-3-O-蕓香糖。

胡春比較了蘆丁、槲皮素、桑色素、橙皮苷在不同體系中抗氧化作用表明，這幾種黃酮抑制豬油過氧化的能力為：槲皮素，桑色素，蘆丁≈橙皮苷，并且提出酚羥基與7-OH糖苷結(jié)合后不利于其清除自由基活性，而3-OH和4-碳基可能起著更重要的作用，黃酮體中的有效酚羥基為3-OH，5-OH，4-碳基和B環(huán)鄰二-OH。

槲皮素4’-OH供氫后容易與3’-OH形成分子內(nèi)氫鍵，同時通過共振形成更穩(wěn)定的半酮式自由基，可以中斷油脂自動氧化的自由基鏈反應(yīng)，從而達到抗氧化目的。而對于蘆丁，由于3-OH被芳香糖取代成糖昔后，失去了其3-OH的活性，同時，大蕓香糖基使整個分子結(jié)構(gòu)發(fā)生重排，使得蘆丁的分子能量降低，3’-OH和4’-OH的活性都有較大減弱，其抗氧化性能也大大降低。

1.2 槲皮素與蘆丁在其他功能上的差異

CotrlIe等研究了10種黃酮類化合物的羥基多少和經(jīng)基部位與其生物活性的構(gòu)效關(guān)系，結(jié)果表明，槲皮素與蘆丁有共同的分子骨架，所不同的是蘆丁C環(huán)上的經(jīng)基為糖苷鍵，而將槲皮素和蘆丁事先與淋巴細胞溫育可以防止O-LDL對細胞的毒性效應(yīng)，揭示了它們的LC50分別為0.1 μmol/L和2μmol/L,體外對肝微粒體依賴NADPH和CCl4誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化的保護作用，槲皮素也明顯優(yōu)于蘆丁，體外對人腫瘤細胞生長的抑制作用，也顯示同樣的效果。因此，槲皮素不僅僅是抗氧化活性比蘆丁強，其他的功能也要比蘆丁強。

1.3 酶解蘆丁與蘆丁的抗氧化實驗研究進展

目前，國內(nèi)外大多采用化學(xué)法水解黃酮昔的糖苷鍵，通過黃酮的醚化、酪化、?；然瘜W(xué)反應(yīng)，可以改變黃酮的特性，如提高脂溶性，增加吸收率，但是這些反應(yīng)是沒有選擇性的，在反應(yīng)的過程中會屏蔽黃酮化合物的主要功能團——酚羥基，對抗氧化產(chǎn)生不利影響。同時有研究表明，其他的非黃酮類物質(zhì)如有機酸類、萜烯類等大都被徹底分解而對物質(zhì)的功效作用產(chǎn)生不利的影響。目前有研究表明，采用生物酶解方法對黃酮分子進行修飾，使黃酮苷轉(zhuǎn)化為黃酮苷元，可以大大提高黃酮類化合物的生物效價，同時，這種酶解的方法反應(yīng)具有溫和、環(huán)保經(jīng)濟、反應(yīng)具有高度的選擇性等優(yōu)點。賓麗英報道用β-葡萄糖苷酶對槐米提取物蘆丁等黃酮苷產(chǎn)生酶解作用，使苷變成苷元后，經(jīng)紫外吸收光譜掃描后發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過酶解的蘆丁呈現(xiàn)出槲皮素的紫外吸收峰特征。用酶解前與酶解后的物質(zhì)進行抗氧化實驗，結(jié)果表明酶解后的蘆丁抗氧化活性比酶解前提高了3倍多。

2 酶解黃酮的研究進展

2.1 酶解黃酮的工藝研究進展

吳超間等對比了β-葡萄糖苷酶和酸對銀杏葉提取物的酶解和酸解，經(jīng)HPLC檢測發(fā)現(xiàn)，酶解后的溶液中生成了一系列的黃酮苷元，而其他的成分沒有明顯的變化；而酸解的溶液在生成新的黃酮苷元的同時，其他的成分大都被徹底分解。因此，酶解方法因為酶的高度專一性和選擇性，在制備高生理活性的黃酮苷元的同時保留了其他活性成分。

張巖問等研究了利用黑曲霉菌株生成的酶水解葛根異黃酮，去除了葛根異黃酮上的部分糖基使其生成相應(yīng)的活性較高的苷元。謝明杰等利用 Absidia sp. R菌株，通過液體發(fā)酵得到一種高活性的大豆異黃酮糖苦水解酶，該酶能使染料木苷生成染料木素的轉(zhuǎn)化率達到100％。

2.2 酶解黃酮與原黃酮的抗氧化活性的對比

賓麗英研究了用β-葡萄糖苷酶來水解大豆和葛根提取物、槐米提取物、黃蘋昔、蘆丁、橙皮苷、大豆苦等樣品，進一步比較酶解前后各樣品在豬油中抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)酶解后黃酮苷的抗氧化活性都有了不同程度的提高，其中蘆丁、大豆苷、黃芩苷的提高更顯著，酶解后蘆丁、大豆苷的抗氧化活性提高了3倍多，與BHT相當(dāng)，而黃芩苷在酶解后抗氧化活性甚至比BHT還高。

據(jù)報道，黃酮苷元清除人體氧自由基的生物活性明顯優(yōu)于黃酮糖苷，黃酮苷元的效價是黃酮糖苷效價的7倍。黃酮苷元的活性之所以大大優(yōu)于黃酮糖苷，第一個原因是因為黃酮苷上的-OH與糖苷鍵結(jié)合后分子結(jié)構(gòu)發(fā)生重排，分子能量降低，使得抗氧化活性也降低了；另外一個原因是因為人體不能直接吸收糖苷型黃酮化合物，而僅有苷元型黃酮可以直接被吸收進入動物血液中。糖苷型的黃酮類化合物只能在腸道中被微生物通過雜環(huán)裂解方式降解和代謝，其中僅有小部分黃酮在結(jié)腸內(nèi)益生菌(如乳酸菌和雙歧桿菌)分泌的水解酶作用下，產(chǎn)生苷元再重新吸收進入血液。因此，黃酮苷在動物體內(nèi)的生物利用率遠遠低于黃酮苷元，其抗氧化活性也低于黃酮苷元。經(jīng)過酶解后的黃酮苷其糖基會與黃酮苷元上的-OH斷開而表現(xiàn)出黃酮苷元的生理活性，因此酶解后的黃酮苷抗氧化活性會得到顯著提高。

3 討論

蜂膠經(jīng)過提純后得到的蜂膠膏一般含有30％的黃酮類化合物(比色法)，其中含有比較多的黃酮苷類化合物。而目前的研究結(jié)果表明，黃酮苷元的抗氧化活性比黃酮苷的抗氧化活性強很多；同時在人體內(nèi)只有苷元型黃酮可以被直接吸收到血液中，而黃酮苷類物質(zhì)不能夠被人體直接吸收，只能在腸道中被雜環(huán)裂解的方式降解和代謝，其中僅有一小部分在結(jié)腸內(nèi)益生菌分泌的水解酶的作用下產(chǎn)生苷元被吸收到血液中。因此黃酮苷類物質(zhì)在人體內(nèi)的利用率是很低的，其抗氧化活性也是得不到保證的。那么假如我們將蜂膠進行酶解，得到黃酮苷類物質(zhì)被完全降解后的蜂膠制品，所含的黃酮苷元含量也會增加，其抗氧化活性肯定也會顯著增強。因此，酶法降解蜂膠黃酮苷能夠顯著提高蜂膠的抗氧化活性，能夠為更深層次的開發(fā)蜂膠奠定基礎(chǔ)。

引自《蜜蜂雜志》2007（1）