摘要：對(duì)蜂王漿中10-HDA的來源、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及功能等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行了介紹，并對(duì)近年來不斷改進(jìn)和完善的幾種測(cè)定方法，如分光光度法、色譜法、酶聯(lián)免疫法、氣相色譜-質(zhì)語法等進(jìn)行了簡(jiǎn)要分析。

關(guān)鍵詞：蜂王漿；10-HDA；功能測(cè)定方法

1 10-HDA的來源、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及功能

1.1 來源

10-羥基-2-癸烯酸是由德國(guó)科學(xué)家D.J.朗格(1921)首次在工蜂上額腺中發(fā)現(xiàn)的，日本學(xué)者佐藤道夫也以大量數(shù)據(jù)證實(shí)，10-HDA主要分泌于工蜂的上顎腺。剛出房的工蜂上顎腺中10-HDA含量極微，隨著日齡的增加，含量有增加的趨勢(shì)，15～20日齡哺育蜂的上顎腺中含量最高，20日齡以后開始有降低的趨勢(shì)，10-HDA含量的增加與青年哺育蜂分泌蜂王漿有關(guān)，在蜂群大繁殖期含量極高，而外勤蜂上顎腺中的10-HDA含量則極低。1957年Batendt 首先報(bào)導(dǎo)從王漿中分離出10-HDA，至今還未在自然界其他物質(zhì)中發(fā)現(xiàn)此化合物，所以10-HDA通常又被稱為王漿酸。

1.2 性質(zhì)

10-HDA是王漿中很重要的一種脂肪酸，占總脂肪酸的50％，在王漿中的含量也相對(duì)恒定，約為1.8％左右。常溫時(shí)為白色晶體，性質(zhì)穩(wěn)定，在室溫或高溫下長(zhǎng)時(shí)間存放時(shí)，結(jié)構(gòu)不會(huì)被破壞或完全消失。易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚，微溶于丙酮，難溶于水，熔點(diǎn)為64℃?？梢员容^容易地從蜂王漿中將其分離出來，也可進(jìn)行人工合成。

1.3 功能

大多數(shù)研究表，10-HDA具有重要的生理功能，而且在自然界中為蜂王漿所特有，所以一直以來被作為衡量蜂王漿質(zhì)量及辨別其真?zhèn)蔚闹匾笜?biāo)。但是，1981年日本琦玉養(yǎng)蜂株式會(huì)社的技術(shù)人員通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在蜂王漿已全部炭化的高溫條件下，王漿酸的殘余率竟高達(dá)90％以上，這個(gè)事實(shí)證明了王漿酸很穩(wěn)定，也讓人們對(duì)10-HDA能否作為蜂王漿的質(zhì)量指標(biāo)開始產(chǎn)生質(zhì)疑。相關(guān)試驗(yàn)證明，無論貯藏條件如何，即使蜂王漿已經(jīng)變質(zhì)，其中的10-HDA含量都不會(huì)改變，顯然，它不適合作為蜂王漿品質(zhì)的敏感指標(biāo)，另外，雖然10-HDA為蜂王漿所特有，但是也可以通過很多方法進(jìn)行人工合成，所以把10-HDA作為衡量蜂王漿品質(zhì)優(yōu)劣及是否摻假的特征指標(biāo)是不恰當(dāng)?shù)摹?

但目前世界上很多國(guó)家仍將10-HDA作為蜂王漿的主要質(zhì)量指標(biāo)，尤其在出口方面，往往以其含量高低作為蜂王漿優(yōu)劣和定價(jià)的關(guān)鍵。建立和改進(jìn)蜂王漿中10-HDA含量的測(cè)定方法一直是研究?jī)?nèi)容之一。

2 10-HDA的測(cè)定方法

迄今為止已經(jīng)建立了很多種測(cè)定10-HDA的方法，包括薄層掃描法、氣相色譜法、高效液相色譜法、分光光度法、酸度轉(zhuǎn)換法、毛細(xì)管等速電泳法、紅外光譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。上述測(cè)定方法在實(shí)際應(yīng)用中各有優(yōu)缺點(diǎn)，劉放等人曾先后對(duì)其中的一些方法進(jìn)行了分析和比較。隨著色譜技術(shù)和其他相關(guān)技術(shù)的發(fā)展，原來的測(cè)定方法不斷被改進(jìn)和優(yōu)化，如分光光度法、色譜法等，同時(shí)許多新方法相繼被提出，如酶聯(lián)免疫吸附法、GC-MS法等。

2.1 分光光度法

包括紫外分光光度法、薄層層析-紫外分光光度法、聚酰胺薄膜層析-分光光度法、二階導(dǎo)數(shù)分光光度法、紅外分光光度法。對(duì)該方法研究最多的是樣品前處理的改進(jìn)及最佳波長(zhǎng)的選定。趙靜報(bào)道的三波長(zhǎng)-紫外光譜法通過消除干擾因素，使傳統(tǒng)紫外光譜法導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高的問題得到了改善問。近年來出現(xiàn)的許多新的分光光度法，如示差分光光度法和一階導(dǎo)數(shù)分光光度法，樣品無需事先分離就能消除共有組分的干擾，測(cè)定快速簡(jiǎn)便，是應(yīng)用較廣的分析方法之一。

2.2 色譜法

包括薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法。幾種色譜測(cè)定法中，氣相色譜法須進(jìn)行硅烷化或甲酯化處理，操作較為繁瑣。薄層色譜法易受試驗(yàn)環(huán)境等多種因素的影響，方法重現(xiàn)性差，故以高效液相色譜法較為理想。由于它具有操作較簡(jiǎn)便、省時(shí)，結(jié)果靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，所以仍然是目前王漿酸定量分析中研究最多且有著廣泛應(yīng)用前景的測(cè)定方法。色譜法的研究重點(diǎn)是供試樣品的準(zhǔn)備、色譜條件的優(yōu)化、流動(dòng)相及固定相的選擇。值得一提的是劉滿倉等人用自行合成的乙烯基交聯(lián)氨基鍵合固定相建立了不經(jīng)分離、只需稀釋就可進(jìn)樣定量分析蜂王漿中10-HDA的高效液相色譜方法，使10-HDA的測(cè)定變得更加準(zhǔn)確而簡(jiǎn)便。孫保國(guó)等建立的膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法用內(nèi)標(biāo)法定量測(cè)定10-HDA，不但快速簡(jiǎn)便，而且消除了其它脂肪酸的干擾，檢測(cè)成本也比HPLC法低很多。

2.3 酶聯(lián)免疫吸附法(EUSA)

免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)是70年代發(fā)展起來的新技術(shù)，潘榮生等人將其引用到10-HDA的檢測(cè)中，主要原理是將10-HDA結(jié)構(gòu)中一端原有的羧基通過化學(xué)修飾的方式加以保護(hù)，將另一端的經(jīng)基與琥珀酸酐反應(yīng)，連接一個(gè)帶有羥基的“橋”，用混合酸酐法將10-HDA與載體蛋白偶聯(lián)，制備得到10-HDA，人工合成免疫原。抑制試驗(yàn)顯示其檢測(cè)范圍在7.812～250 ug/g之間。對(duì)照試驗(yàn)表明，用該法檢測(cè)的結(jié)果與液相色譜法的符合率為91％以上。ELISA的應(yīng)用，為檢測(cè)機(jī)構(gòu)和基層單位提供了一個(gè)簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的10-HDA測(cè)定方法。

2.4 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)

該方法選用DB-17石英毛細(xì)管柱，采用色譜柱程序升溫，利用毛細(xì)管不分流進(jìn)樣及其溶劑效應(yīng)技術(shù)，并應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜選擇離子測(cè)定方式來進(jìn)行測(cè)定。在試驗(yàn)過程中，首先用10-HDA標(biāo)準(zhǔn)溶液通過全掃描方式做出總離子流圖，然后根據(jù)其質(zhì)譜圖中的碎片離子針對(duì)各種樣品進(jìn)行選擇離子測(cè)定方式的選擇試驗(yàn)，最后確定73，86，124 amu碎片離子作為定量的特征目標(biāo)監(jiān)測(cè)離子。應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜選擇離子測(cè)定方式具有靈敏度高、選擇性好和抗干擾的特點(diǎn)。

引自《中國(guó)蜂業(yè)》2006（3）