摘要：本文主要介紹了指紋圖譜技術(shù)在蜂蜜種類(lèi)識(shí)別和蜂蜜活性物質(zhì)研究中的應(yīng)用，并提出了我國(guó)開(kāi)展蜂蜜指紋圖譜研究的意義。

關(guān)鍵詞：蜂蜜；指紋圖譜；酚酸類(lèi)化合物；黃酮類(lèi)化合物；高效液相色譜

1 前言

目前，我國(guó)已有檢測(cè)真假蜂蜜的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法，即采用穩(wěn)定同位素質(zhì)譜儀測(cè)定蜂蜜中的碳-4-植物糖。該法不僅檢測(cè)儀器昂貴，而且檢測(cè)方法難度較大，很難在企業(yè)中推廣應(yīng)用。近年來(lái)國(guó)外對(duì)蜂蜜的成分研究表明，蜂蜜中存在著微量的生物活性物質(zhì)。不同的單花蜂蜜，其特征成分存在很大的差異，采用指紋圖譜技術(shù)研究不同種類(lèi)蜂蜜中的微量生物活性物質(zhì)和非活性物質(zhì)，可以有效地區(qū)分不同蜜源植物來(lái)源的蜂蜜，并且可以用于蜂蜜的質(zhì)量控制中，尤其在鑒別蜂蜜種類(lèi)、判斷真假蜂蜜中，指紋圖譜技術(shù)具有其他方法不可替代的優(yōu)勢(shì)。

2 指紋圖譜的起源與定義

現(xiàn)代“指紋(Fingerprints)”鑒定始于19世紀(jì)末20世紀(jì)初的犯罪學(xué)(criminology)和法醫(yī)學(xué)。而每一個(gè)人的指紋在微小的細(xì)節(jié)構(gòu)造上各有不同，這種“唯一性”的指紋則形成了據(jù)以鑒別每個(gè)人的特征。蜂蜜主要來(lái)源于蜜源植物的花蜜，同一蜜源植物由于遺傳性有著整體的相似性，因此，同一種類(lèi)的單花蜜在成分上也具有相似性。蜜蜂將花蜜采集回來(lái)后，通過(guò)自身的釀造后，蜂蜜和花蜜只是在糖分組成上發(fā)生了變化，而其中的微量成分如源于植物中的次生代謝物一般不會(huì)發(fā)生較大的變化。這為采用指紋圖譜技術(shù)鑒別蜂蜜的種類(lèi)提供了可能。另外，來(lái)源于蜜源植物的花蜜中除了存在植物的次生代謝物，一些植物激素也可能在花蜜中存在，而以淀粉為原料生產(chǎn)的假蜂蜜中不合有植物激素，因此，可以通過(guò)測(cè)定蜂蜜中的植物激素來(lái)鑒別真假蜂蜜，如果該法可靠，只要有一臺(tái)普通的液相色譜儀就可以完成。目前，指紋圖譜技術(shù)在蜂蜜質(zhì)量控制的應(yīng)用尚處于研究階段，在我國(guó)還沒(méi)有開(kāi)展這方面的研究工作。

我國(guó)是世界蜂蜜生產(chǎn)和出口大國(guó)，擁有很多珍貴的特種單花蜜，其中的特有成分至今還尚未研究，應(yīng)用現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)蜂蜜中微量化學(xué)成分信息以圖形(圖像)的方式進(jìn)行表征并加以描述，這就是蜂蜜指紋圖譜的內(nèi)涵。

3 蜂蜜中微量活性成分的色譜檢測(cè)技術(shù)

蜂蜜中除了含有常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分外，還含有來(lái)源于蜜源植物的特有成分。目前已知的成分包括黃酮類(lèi)化合物、酚酸類(lèi)化合物、有機(jī)酸、脫落酸、芳香物質(zhì)等，這些物質(zhì)必須借助色譜技術(shù)才能夠準(zhǔn)確測(cè)定。

3.1 黃酮類(lèi)化合物

蜂蜜中的黃酮可能來(lái)源于植物、花粉和蜂膠，其中主要以貳元形式存在，原因是植物的花蜜經(jīng)蜜蜂釀制后，糖基部分被蜜蜂體內(nèi)的酶水解掉了。西班牙科學(xué)家Federico等采用XAD-2型樹(shù)脂吸附，借助SePhadex LH-20凝膠層析，反相液相色譜儀分離技術(shù)，從LaAlcaDia地區(qū)的蜂蜜中分離出了16種黃酮類(lèi)化合物，含量較多的有槲皮素，坎菲醇，3-甲氧基-坎菲醇，異鼠李素，柯因，3，3’-二甲氧基-槲皮素，高良姜素，芹菜素，生松素，生松素醇等。該研究沒(méi)有報(bào)道蜂蜜的種類(lèi)。

該研究小組還發(fā)現(xiàn)，柑桔蜜中存在有橙皮素，而其他種類(lèi)的蜂蜜中尚未檢測(cè)出該物質(zhì)。Isabel等采用色譜技術(shù)從澳大利亞產(chǎn)的小校樹(shù)蜜中鑒定出了多種黃酮類(lèi)化合物，雖然楊梅酮，五羥黃酮，槲皮素，坎菲醇，毛地黃黃酮存在所有被檢測(cè)的桉樹(shù)蜜樣品中，但是，五羥黃酮主要存在于一種叫Eucalyptus camaldulensis的桉樹(shù)蜜中，毛地黃黃酮主要存在于Eucalyptus pilligaensis桉樹(shù)蜜中，兩種黃酮分別可以作為不同種類(lèi)桉樹(shù)蜜的黃酮類(lèi)化合物的標(biāo)記物。Isabel等人比較了不同產(chǎn)地的迷迭香蜂蜜中的黃酮類(lèi)化合物，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)自突尼斯的迷迭香蜂蜜只含有8-甲氧基-坎菲醇和坎菲醇，而產(chǎn)自西班牙的迷迭香蜂蜜中含有10種以上的黃酮類(lèi)化合物，其中8-甲氧基-坎菲醇和坎菲醇的含量與突尼斯產(chǎn)的迷迭香蜂蜜相同，因此，這兩種化合物可以作為迷迭香蜂蜜的標(biāo)記化合物。隨著對(duì)蜂蜜中黃酮類(lèi)化合物研究的不斷深入，許多單花蜜中的黃酮類(lèi)化合物被檢測(cè)出來(lái)，由于每一種蜂蜜來(lái)自不同的蜜源植物，其成分存在一定的差異，正是這種差異，為蜂蜜指紋圖譜的建立和應(yīng)用提供了可能。當(dāng)然，建立每一種蜂蜜黃酮類(lèi)化合物的指紋圖譜需要做大量的工作，尤其是樣品的采集非常重要。

3.2 酚酸類(lèi)化合物

酚酸類(lèi)化合物是廣泛存在于自然界的一類(lèi)有機(jī)化合物，按照其結(jié)構(gòu)可分為多酚和單酚。其中單酚中的酚酸類(lèi)化合物廣泛存在于蜂蜜中。近年來(lái)研究表明，酚酸具有抗病毒、抗菌、提高機(jī)體免疫功能、抗氧化、抗炎癥等多種功能，因此越來(lái)越引起人們的關(guān)注。蜂蜜中的酚酸主要來(lái)源于蜜源植物的花蜜、花粉和蜂膠，不同種類(lèi)的蜂蜜其酚酸組成也不相同。Yao等人研究表明，產(chǎn)自澳大利亞的金娘科桃金娘屬(Leptospennum)一種植物的蜂蜜中主要含有沒(méi)食子酸和香豆酸，另外還含有大量鞣花酸和氯原酸。新西蘭產(chǎn)的麥盧卡蜜(也屬于金娘科桃金娘屬植物的一種)中苯甲酸含量最高，達(dá)到14.0mg／100g，但是苯甲酸不屬于酚酸，而含量最高的酚酸仍然是沒(méi)食子酸，香豆酸含量較低。因此，沒(méi)食子酸和香豆酸均是上述兩類(lèi)蜂蜜的植物標(biāo)記物，只是前者的香豆酸含量高于后者，但沒(méi)食子酸含量低于后者，這也是二者的主要區(qū)別。Roderick等人在研究新西蘭和北愛(ài)爾蘭產(chǎn)的蜂蜜時(shí)發(fā)現(xiàn)，不同種類(lèi)的蜂蜜其酚酸的色譜圖存在很大的差異，同類(lèi)蜂蜜(麥盧卡蜜)的色譜圖則具有很多相似性。葡萄蜜中主要含有丁香酸，苜蓿草蜜和石南花蜜主要含有苯甲酸和香草酸，這些成分均是構(gòu)建單花蜜指紋圖譜的基礎(chǔ)。

近年來(lái)，在研究蜂蜜中的微量成分時(shí)采用了毛細(xì)管電泳技術(shù)，該法能夠精確分離蜂蜜中的各種酚類(lèi)化合物，Andrade等采用毛細(xì)管電泳技術(shù)從11個(gè)蜂蜜樣品中分離出了27種酚類(lèi)化合物，發(fā)現(xiàn)不同種類(lèi)的蜂蜜其酚類(lèi)化合物組成存在很大的差異，迷迭香酸是百里香蜜的特征物質(zhì)，4，5，7-三羥烷酮是薰衣草蜜的特征成分，橙皮素是柑桔蜜的特征成分，而鞣花酸主要存在于石南蜜中。另外，石南蜜中還含有相當(dāng)數(shù)量的咖啡酸苯乙酯化合物。這些研究雖然很具有前景，但是需要大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)驗(yàn)證該結(jié)果用于區(qū)分單花蜜的可靠性。

4 小結(jié)

蜜蜂在一個(gè)花季采集花蜜時(shí)，可能采集到兩種以上的花蜜，如何建立百花蜜的指紋圖譜國(guó)外已有一些探索性的研究。我國(guó)擁有豐富的蜜源植物，大宗單花商品蜂蜜就多達(dá)50多種，其中許多單花蜜具有地域特色，屬我國(guó)特有的蜂蜜，但是我們對(duì)其中含有活性成分的構(gòu)成知之甚少，許多工作有待我們深入系統(tǒng)的研究，最終讓我們能夠了解蜂蜜的真正內(nèi)涵，使之更好地為人類(lèi)的健康服務(wù)。

參考文獻(xiàn)（略）

引自《中國(guó)蜂業(yè)》2006（3）