摘要：現(xiàn)代研究征明蜂膠具有顯著的抗腫瘤活性，國內(nèi)外研究人員對其化學(xué)成分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)蜂膠中以咖啡酸苯乙酯、阿替匹林、白楊素等為代表的幾大類成分均具有顯著的抗腫瘤作用。本文綜述了以上各類成分的抗腫瘤作用及其作用機(jī)制的研究進(jìn)展。

關(guān)鍵詞：蜂膠；抗腫瘤；活性成分

蜂膠作為一種天然藥物，已證明其具有抗病原微生物、抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤作用，特別是其抗腫瘤作用引起人們廣泛的關(guān)注。研究表明蜂膠對人鼻咽癌、子宮頸癌、乳腺癌、腎癌、大腸癌等人癌細(xì)胞株均具有強(qiáng)烈的毒殺作用。已有多種抑制腫瘤細(xì)胞生長的有效成分已被鑒定出來，主要是咖啡酸及肉桂酸類的衍生物和黃酮類化合物等。本文就蜂膠的抗腫瘤成分及作用機(jī)理研究進(jìn)展進(jìn)行簡要論述。

1 咖啡酸類衍生物

CAPE(咖啡酸苯乙酪)是蜂膠中一種較早被確認(rèn)的抗腫瘤成分。近年國外研究報(bào)道，作為蜂膠抗腫瘤作用的主要活性成分，對人白血病細(xì)胞和多種實(shí)體瘤細(xì)胞具有明顯的抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡作用，而且能顯著抑制NIH/3T3細(xì)胞被肉瘤相關(guān)病毒MuSV-124的惡性傳染。CAPE能抑制兩種腫瘤細(xì)胞系的生長，調(diào)節(jié)兩種細(xì)胞系中與腫瘤相關(guān)抗體的表達(dá)。CAPE可選擇性誘導(dǎo)癌細(xì)胞株的DNA斷裂。如鼠高肝轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌26-Ij細(xì)胞株、鼠高肝轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤BL6細(xì)胞株、鼠肺癌LLC細(xì)胞株、人纖維肉瘤HT-1080細(xì)胞株、人肺腺癌A549細(xì)胞株和人宮頸癌HeLa細(xì)胞株的生長均有抑制作用，但不同的細(xì)胞株對，CAPE的敏感性不同。結(jié)腸癌26-L5細(xì)胞的半數(shù)致死濃度(EC50))為0.15μmol·L-1，而HeLa細(xì)胞為10.7 μmol·L-1。CAPE還可減少由致癌物氧化偶氮甲烷導(dǎo)致的小鼠結(jié)腸畸形腺窩灶(ACF)的形成和腫瘤的產(chǎn)生，而目前認(rèn)為結(jié)腸黏膜ACF的形成是導(dǎo)致大腸癌發(fā)生的關(guān)鍵階段。更值得研究人員興奮的是CAPE及其衍生物對不同細(xì)胞具有選擇性的毒性作用，對舌鱗癌、頸部牙齦轉(zhuǎn)移癌等腫瘤細(xì)胞生長具有明顯的抑制作用，但對黏膜成纖維細(xì)胞等正常細(xì)胞卻沒有作用。

CAPE的抗腫瘤作用部分機(jī)理已經(jīng)被闡明。Hye等認(rèn)為具有潛在的抑制腫瘤入侵及轉(zhuǎn)移作用，這種作用是由細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶的調(diào)節(jié)決定的。細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶是一種Zn-依賴的蛋白水解酶，在細(xì)胞外基質(zhì)的分裂增殖過程中起著關(guān)鍵作用。用不同劑量CAPE處理人成纖維肉瘤發(fā)現(xiàn)CAPE能夠顯著下調(diào)基因的表達(dá)水平。另外，也觀察到CAPE能抑制MMP-2活化的全過程，如人侵、活動、細(xì)胞遷移、聚集，為CAPE抗腫瘤提供了有力證據(jù)。

CAPE抗腫瘤作用可能與CAPE能夠修復(fù)細(xì)胞間縫隙連接有關(guān)。用CAPE處理縫隙連接缺失的WB-ras2細(xì)胞后，可引起細(xì)胞生長受抑，細(xì)胞縫隙連接明顯恢復(fù)，其細(xì)胞連接相關(guān)蛋白連接素-43的表達(dá)上調(diào)并定位于細(xì)胞膜。

CAPE能夠抑制腫瘤基因的表達(dá)。CAPE對TPA引起的腫瘤增長和5-經(jīng)甲基-2’-脫氧尿嘧啶形成有潛在的抑制活性，在Hela細(xì)胞培養(yǎng)基中1.25、2.5、5、10、20 mmol·L-1的CAPE對DNA合成抑制率分別為32％、44％、朗％、79％、95％；對RNA合成抑制率分別為39％、43％、58％、64％、75％，對蛋白質(zhì)合成抑制率分別為29％、30％、37％、32％、47％。CAPE處理兩個p53腫瘤突變異種細(xì)胞系NCI-H358和SKOV-3及缺乏型p53細(xì)胞引起cas-pase-3和DNA斷裂。

CAPE引起腫瘤細(xì)胞凋亡作用還可由p38絲裂原活化蛋白激酶通路介導(dǎo)。CAPE(50 μmol·L-1)處理C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞漿，激活CPP32，也上調(diào)了p53、Bax和Bak基因的表達(dá)?；罨思?xì)胞外的ERKs/p38 MAPK通路，p38激酶和p53形成一個復(fù)合體，誘導(dǎo)p53磷酸化，使得C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。

另外，從荷蘭蜂膠中提取得到CAPE類似物咖啡酸苯乙酪、咖啡酸苯丙酯、咖啡酸肉桂醇酯。3種成分對鼠肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌26-L5細(xì)胞都顯示了抑制作用，EC50分別為0.288、1.76和0.114 μmol·L-1。

2 肉桂酸類衍生物

近年來研究人員發(fā)現(xiàn)，Artepillin C (阿替匹林)及其結(jié)構(gòu)衍生物是蜂膠中一類獨(dú)特的對腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒性作用的活性成分。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在體外腫瘤細(xì)胞抑制試驗(yàn)中，100 μ ml-1 Anepillin C發(fā)現(xiàn)具有明顯的細(xì)胞毒作用，能夠強(qiáng)烈抑制人肺癌HLC細(xì)胞(腺癌)、腸癌HGC細(xì)胞、鼠肝癌HTSA細(xì)胞、鼠惡性腫瘤Colon 26和B-16細(xì)胞、喉癌KB細(xì)胞、和鼠黑素瘤上皮細(xì)胞Clone M-3的DNA合成，并能引起HLC、HGC、Colon 26、人白血病細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。在裸鼠移植HLC、HGC、Colon 26、HTSA、PLC/PRF/5、黑色素瘤細(xì)胞動物實(shí)驗(yàn)中，每只裸鼠瘤內(nèi)注射Artepillin C 500 μg，即檢測到細(xì)胞凋亡、有絲分裂中止、腫瘤細(xì)胞核溶解、腫瘤細(xì)胞死亡，最后癌病變組織被膠原限制，腫瘤細(xì)胞入侵浸潤也被阻止，而人正常細(xì)胞的生長不受影響。低劑量Artepillin C(500 μg)還可以預(yù)防鐵-氮基三醋酸酪(FeNTA)誘發(fā)的小鼠支氣管和細(xì)支氣管腺瘤惡性轉(zhuǎn)化，阻止肺癌的發(fā)展。

Artepllin C 對于不同系列的人白血病細(xì)胞如T-淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞、β-淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞、髓性白血病細(xì)胞、非淋巴、非髓性白血病顯示了明顯的細(xì)胞毒作用，100 μml·L-1“處理24h，能顯著誘導(dǎo)這些白血病腫瘤細(xì)胞凋亡，其中對T-淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞作用最強(qiáng)。所有細(xì)胞都觀察到了凋亡小體和DNA碎片。所有白血病細(xì)胞的DNA合成都受到抑制，同時顯微鏡觀察到細(xì)胞被瓦解。白血病細(xì)胞的凋亡可能與Fas抗原的表達(dá)增強(qiáng)和喪失線粒體膜電位有關(guān)。試驗(yàn)證明 Artepllin C有抗白血病作用，但對正常的淋巴細(xì)胞僅僅是有限的抑制作用。

氧化偶氮甲烷處理DDY小鼠造成結(jié)腸癌模型，灌胃80和160 mgkg-1 蜂膠或10 mgkg-1Artepillin C (相當(dāng)160 mg蜂膠)能夠顯著將結(jié)腸畸形腺窩灶的發(fā)生率降低39.2％，43.7％和 43.4％。Shimizu 等將 Artepllin C 加到人結(jié)腸癌腺細(xì)胞WiDr中，發(fā)現(xiàn)能夠誘導(dǎo)細(xì)胞周期G(O)肥(1)期，并抑制腫瘤細(xì)胞生長。通過增強(qiáng)腫瘤關(guān)鍵蛋白Cip1/p21的活性，刺激Cip1/p21的表達(dá)來影響腫瘤細(xì)胞周期。

Akao 等報(bào)道了另外兩種肉桂酸的衍生物 drupanin、Baccharin 對結(jié)腸癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞的抑制活性。濃度為150 μmol·L-1時，它們對以上所有細(xì)胞均有顯著抑制作用，抑制效果為 artepillin C＞Baccharin＞drupanin。從試驗(yàn)結(jié)果推測出該類化合物苯環(huán)上3位異戊二烯基團(tuán)有助于抗腫瘤活性。但 Drupanin 似乎體現(xiàn)了比artepillin C 更小的副作用，對于Con-A誘導(dǎo)的人正常血中淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，Drupanin 要弱于Artepillin C。

3 黃酮類化合物

蜂膠中對腫瘤起作用的黃酮類化合物主要是黃酮及黃酮醇類、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物，這些物質(zhì)對致癌物有抑制作用。試驗(yàn)中用抗微核實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯σ恍S酮和黃酮醇衍生物進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)黃酮醇有抗苯并花的作用，其中高良姜黃素活性最強(qiáng)。蜂膠中的蘆丁、桑黃素、槲皮素均能抑制苯并芘對小鼠皮膚的致癌作用；芹黃素、山奈酚、槲皮素對黃曲霉素B1與DNA加合物的形成有抑制作用，并能明顯抑制對二甲基苯并蒽誘導(dǎo)的小鼠皮膚癌作用；槲皮素對TPA、3-甲基膽恿、N-甲基-N-亞硝基脂等引起的皮膚癌也有抑制作用。

Kyung 等的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蜂膠中的Chrysin(白楊素)能夠誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞U937細(xì)胞凋亡，并闡明了機(jī)理。在U937細(xì)胞中，如使用PI3K抑制劑，抑制了Akt的磷酸化，就會發(fā)現(xiàn)增強(qiáng)了Chrysin的誘導(dǎo)凋亡作用；而如果Akt的過度表達(dá)，則會抑制Chrysin誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。提示了Akt信號途徑在chrysin誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞凋亡過程中起著重要作用，即有可能是建立了ChrYsin和P13K從kt-相關(guān)的通路之間的連接。這對惡性血液疾病提供了一個新的治療策略。還有研究表明Chrysin能夠顯著下調(diào)NF-IL6，抑制了NF-IL6與DNA的結(jié)合，抑制和阻斷癌基因表達(dá)。Chen等從臺灣蜂膠中分離到三種新異戊二烯基黃酮，Propolin A、B、C。Propolin A和B對3個癌細(xì)胞系的都顯示了細(xì)胞毒性，DNA含量和DNA片段分析，Propolin A 有效地誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，并表現(xiàn)出強(qiáng)力的抗大部分自由基的消除作用。Propolin C對于人黑色素瘤細(xì)胞也觀察到細(xì)胞毒作用(IC50為8.5 μmol·L-1)，能夠劑量或時間依賴性地降低幾種能夠引起人黑色素瘤細(xì)胞凋亡的蛋白的水平如Procaspase-8，Bid蛋白、procaspase-3，而且能使細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞漿中，提示了Propolin C的細(xì)胞毒作用是由線粒體介導(dǎo)。

4 雙萜烯酸類化合物

試驗(yàn)用高效液相色譜從巴西蜂膠甲醇提取液中分離出一種抗腫瘤物質(zhì)，定性為新clerodane二萜烯(PMS-1)，分子式C20H32O3；(分子量320)。該化合物能夠抑制DNA的合成減少皮膚癌的發(fā)生率，并且通過降低DNA的合成抑制腫瘤的生長。日本研究人員根據(jù)對人肝細(xì)胞癌細(xì)胞毒性的檢驗(yàn)，從巴西蜂膠甲醇提取液中分離出兩個clerodane雙萜異構(gòu)體，分別為15-氧代-3，13Z-kolavadien-17-含氧酸和15-氧代-3z-13E-kolavadien-17-含氧酸。

5 苯并吡喃類

Luo 從巴西蜂膠中分離出活性成分苯并-Y-毗喃衍生物PM-3，能夠抑制人胸腺癌MCF-7細(xì)胞生長。在G1階段用PM-3處理MCF-7細(xì)胞，結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞周期蛋白D1和E蛋白水平的降低，PM-3也抑制了轉(zhuǎn)錄水平上的細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)。從巴西蜂膠分離出（Z）-2，2-甲基-8-(3-甲基-2-丁基)-苯并吡喃-6-丙烯酸(A)和(E)-2，2-甲基-8-(3-甲基-2-丁基)-苯并吡喃-6-丙烯酸(B)。在紫外線(365 nm)照射下B迅速變成A，也觀察到相反的反應(yīng)。反應(yīng)從A或B開始，A和B的比率到達(dá)2.3，達(dá)到一個光穩(wěn)定態(tài)。在抗人肺癌細(xì)胞HLC-20方面，A比B的細(xì)胞毒性強(qiáng)7倍。

蜂膠的抗腫瘤作用早已為人所知，但是一些研究報(bào)道值得注意。烏拉圭蜂膠的乙醇提取物是乳腺癌的一種抑制劑，而巴西蜂膠的水提取物和乙醇提取物對乳腺癌影響不大。說明蜂膠的來源和制備對于抑制腫瘤非常重要。還有報(bào)道，在成年大鼠抗艾氏癌實(shí)驗(yàn)中，蜂膠醇提液與博來霉素合用時的大鼠存活率要低于二者單獨(dú)使用時的存活率。

近十年來，蜂膠以及其中的抗腫瘤活性成分的研究取得了巨大進(jìn)展。不少效果良好的抗腫瘤成分成分結(jié)構(gòu)新穎、有藥用前途的先導(dǎo)化合物。我國是世界上養(yǎng)蜂和蜂產(chǎn)品生產(chǎn)大國，蜂膠資源豐富，隨著對蜂膠抗腫瘤作用及其作用機(jī)理的不斷深入研究，蜂膠在征服癌癥中必將發(fā)揮應(yīng)有的作用。

引自《中國蜂業(yè)》2007（50）