無公害食品標(biāo)準(zhǔn)-蜂膠(NY5136―2002)
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1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了無公害蜂膠的定義、質(zhì)量要求、檢驗方法、檢驗規(guī)則、標(biāo)志、包裝 運輸、貯存要求。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于蜂膠的生產(chǎn)、加工和銷售。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB 4789.2 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定
GB 4789.3 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 大腸菌群測定
GB 4789.4 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗
GB 4789.5 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 志賀氏菌檢驗
GB 4789.10 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗
GB 4789.11 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 溶血性鏈球菌檢驗
GB 4789.15 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 霉菌和酵母計數(shù)
GB/T 5009.11 食品中總砷的測定方法
GB/T 5009.12 食品中鉛的測定方法
GB/T 5009.17 食品中總汞的測定方法
GB/T 5009.19 食品中六六六、滴滴涕殘留量的測定方法
GB 15204 食品容器、包裝材料用偏氯乙烯–氯乙烯共聚樹脂衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
GB 16331 食品包裝材料用尼龍 6樹脂衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
GB 16332 食品包裝材料用尼龍成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
GB/T 17332 食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)制劑多種殘留的測定
3 術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
3.1 蜂膠 propolis
蜜蜂將采自植物的枝條、葉芽及愈傷組織等的分泌物與上腭腺、蠟腺等的分泌物同少量花粉混合后所形成的粘性物質(zhì)。
3.2 總黃酮 total flavonoids
蜂膠中黃酮及類黃酮類物質(zhì)的含量總和。本標(biāo)準(zhǔn)是以蜂膠中常見的高良姜素（galangin）、槲皮素（quercetin）、蘆?。╮utin）、楊梅酮（myricetin）、莰菲醇（kaempferol）、芹菜素（apigenin）、松屬素（pinocembrin）、柯因（chrysine）等 8種黃酮含量之和表示。
3.3 氧化時間 oxidation time
蜂膠的綜合抗氧化能力（即綜合還原能力），通常指一定量的蜂膠使一定體積的濃度為0.01moL的高錳酸鉀液的紫紅色完全消退所需時間，用秒來計量。
4 質(zhì)量要求
4.1 感官指標(biāo)
無公害蜂膠的感官指標(biāo)應(yīng)符合表1的規(guī)定。
表1 感 官 指 標(biāo)
狀 態(tài) 不透明的團(tuán)塊或碎片，在35℃以上逐漸變軟，有粘性和可塑性
氣 味 有明顯的芳香味
色 澤 褐色、灰褐、暗綠、灰黑色等，有光澤
滋 味 有明顯的辛辣感
4.2 理化指標(biāo)
無公害蜂膠的理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。
表2 理 化 指 標(biāo)
項 目 指 標(biāo)
總黃酮含量/（%） ≥8
氧化時間/s ≤22
75%乙醇提取物含量/（%） ≥55
蜂蠟和75%乙醇不溶物含量/（%） ≤45
4.3 微生物指標(biāo)
無公害蜂膠原料的微生物指標(biāo)應(yīng)符合表3的規(guī)定。
表3 蜂膠的微生物指標(biāo)
項 目 指 標(biāo)
菌落總數(shù)/（cfu/g） ≤1000
大腸菌群/（MPN/100g） ≤30
霉菌及酵母菌數(shù)/（cfu/g） ≤200
致病菌 不得檢出
4.4 有毒有害物質(zhì)限量
無公害蜂膠原料的有毒有害物質(zhì)限量應(yīng)符合表4規(guī)定。
表4 有毒有害物質(zhì)限量
項 目 指 標(biāo)
鉛（以Pb計）/（mg/kg） ≤1
砷（以As計）/（mg/kg） ≤0.3
汞/（mg/kg） ≤0.3
六六六/（mg/kg） ≤0.05
滴滴涕/（mg/kg） ≤0.05
氟胺氰菊脂/（mg/kg） ≤0.05
5 檢驗方法
5.1 抽樣與取樣
5.1.1 抽樣方法
每批20件以下者，抽樣件數(shù)不少于50%；20件以上者，每增加10件，增抽樣品一件。
5.1.2 取樣方法
隨機(jī)從包裝中取出蜂膠若干，對于塊狀蜂膠，用工具從不同的膠塊的不同部位上采取5g～10g樣品，每一批的取樣總量不超過300g。將塊狀的樣品放入3℃～10℃的冰箱中1 h后，取出樣品，用電動粉碎機(jī)將其粉碎成粉狀。
5.2 感官檢驗
5.2.1 色澤
將蜂膠塊冷凍后，用錘砸開，在自然光的環(huán)境中觀察外表及斷面的光澤度。
5.2.2 黏性
將蜂膠塊（沫）加熱至35℃～60℃以上，用于揉搓成條，再慢慢向兩端拉伸。含膠量越大，黏性越大，拉伸長度亦越大。
5.2.3 氣味、滋味
取2g試樣置于一的玻璃板上，先口嘗蜂膠的滋味，再點燃，嗅其氣味是否異常。
5.3 理化檢驗
5.3.1 蜂膠總黃酮含量的測定（見附錄A）。
5.3.2 蜂膠抗氧化時間的測定（見附錄A）。
5.3.3 蜂膠中乙醇可溶物的含量測定（見附錄A）。
5.3.4 蜂蠟和不溶物的含量測定（見附錄A）。
5.4 微生物檢驗
5.4.1 菌落總數(shù)
按GB 4789.2規(guī)定的方法測定
5.4.2 大腸菌群
按GB 4789.3規(guī)定的方法測定
5.4.3 霉菌及酵母計數(shù)
按GB 4789.15規(guī)定的方法測定
5.4.4 致病菌
按GB 4789.4、GB 4789.5、GB 4789.10、GB 4789.11規(guī)定的方法測定。
5.5 有毒有害物質(zhì)檢驗
5.5.1 六六六、滴滴涕
按GB/T 5009.19規(guī)定的方法測定。
5.5.2 氟胺氰菊酯
按GB/T 17331規(guī)定的方法測定。
5.6 鉛、砷、汞
分別按GB/T 5009.12、GB/T 5009.11、GB/T 5009.17規(guī)定的方法測定。
6 檢驗規(guī)則
6.1 組批規(guī)則
6.1.1 產(chǎn)品均應(yīng)以批為單位，同批產(chǎn)品的品質(zhì)、規(guī)格、包裝應(yīng)整齊一致。
6.1.2 同一班次，用同一原料、按同一過程所生產(chǎn)的同規(guī)格產(chǎn)品為一個貨批。
6.2 檢驗類型
6.2.1 型式檢驗
型式檢驗是對產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行全面考核，即對本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的全部要求（指標(biāo)）進(jìn)行檢驗。有下列情形之一者應(yīng)對產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行型式檢驗：
a）產(chǎn)品出口、評優(yōu)或國家質(zhì)量監(jiān)督機(jī)構(gòu)、行業(yè)主管部門提出型式檢驗要求；
b）前后兩次抽樣檢驗結(jié)果差異較大；
c）因人為或自然因素使生產(chǎn)環(huán)境發(fā)生較大變化。
6.2.2 交收檢驗
每批產(chǎn)品交收（出廠）前，生產(chǎn)單位都要進(jìn)行感官、標(biāo)志和包裝等的檢驗，檢驗合格后并附合格證的產(chǎn)品方可交收（出廠）。
6.2.3 包裝檢驗
應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)第8章的規(guī)定進(jìn)行。
6.3 抽樣方法
抽樣應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)5.1.1的規(guī)定，從每一批貨中隨機(jī)抽取樣品。
6.4 判定規(guī)則
6.4.1 檢驗結(jié)果全部符合本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的產(chǎn)品為合格。
6.4.2 產(chǎn)品中某一項指標(biāo)不符合要求的，允許對不合格項目進(jìn)行加密取樣復(fù)測，復(fù)測仍不合格的，則判定該批產(chǎn)品為不合格。
6.4.3 該批次樣本標(biāo)志、包裝、凈含量不合格者，允許生產(chǎn)單位進(jìn)行整改后申請復(fù)檢一次。若檢驗結(jié)果中出現(xiàn)不符合本標(biāo)準(zhǔn)衛(wèi)生安全、有毒有害規(guī)定的指標(biāo)、允許復(fù)檢一次，復(fù)檢應(yīng)取同一批產(chǎn)品中副樣進(jìn)行以復(fù)檢結(jié)果為準(zhǔn)。感官和衛(wèi)生指標(biāo)檢測不合格不得復(fù)檢。
7 標(biāo)志
7.1 食品標(biāo)簽
應(yīng)符合GB 7718的要求，且標(biāo)明產(chǎn)品的食用量。運輸包裝上的標(biāo)志應(yīng)與食品標(biāo)簽一致。
7.2 圖示標(biāo)志
應(yīng)符合GB 191的要求。
8 包裝、運輸、貯存
8.1 包裝
8.1.1 包裝材料應(yīng)符合食品衛(wèi)生安全標(biāo)準(zhǔn)要求。
8.1.2 包裝應(yīng)牢固、防潮、整潔，便于裝卸、倉儲和運輸。
8.1.3 產(chǎn)品應(yīng)按產(chǎn)地、規(guī)格分別包裝。
8.2 運輸
8.2.1 運輸時應(yīng)做到運輸工具清潔衛(wèi)生、干燥、無異味、無污染，嚴(yán)禁與有毒、有害、有異味、易污染的物品混裝混運。
8.2.2 運輸途中嚴(yán)防日曬、雨淋，裝卸時應(yīng)輕放輕卸。
8.3 貯存
8.3.1 臨時或短期貯存，應(yīng)以防涼干燥、清潔衛(wèi)生的場所為宜，嚴(yán)禁日曬、雨淋及有毒有害物質(zhì)的污染。
8.3.2 長時間存放，應(yīng)按產(chǎn)品等級、規(guī)格分別堆放，保持貯存場所陰涼干燥。
8.3.3 產(chǎn)品不得與有毒、有害、有異味的物品同處貯存。
附 錄 A
（規(guī)范性附錄）
蜂膠的理化指標(biāo)檢測方法
A.1 蜂膠總黃酮含量的測定
A.1.1 原理
母核上羥基、甲氧基、糖甙元的個數(shù)不同，而形成一系列黃酮和黃酮甙。蜂膠中常見的黃酮是以下8種：高良姜素、槲皮素、蘆丁、楊梅酮、莰菲醇、芹菜素、松屬素、柯因。在紫外波長270 nm處均有吸收。這8種黃酮的分子中因含有羥基的數(shù)量不同因而極性不同，在反向C18柱上的保留時間不同，隨著羥基個數(shù)的減少其保留時間增加。因此8種黃酮出峰的順序應(yīng)是蘆丁→楊梅酮→槲皮素→莰菲醇→芹菜素→松屬素→柯因→高良姜素。用反向高效液相色譜法測定蜂膠中的黃酮含量，快速、準(zhǔn)確、精密度高。
A.1.2 試劑
a）高良姜素，槲皮素，蘆丁，楊梅酮，莰菲醇，芹菜素，松屬素，柯因（色譜純，Sigma公司）。
b）甲醇（優(yōu)級純，并經(jīng)0.5mm濾膜過濾）、乙醇、磷酸（優(yōu)析純）、蒸餾水（重蒸，并經(jīng)0.45mm濾膜過濾）。
A.1.3 設(shè)備和儀器
a）超聲波水??；
b）振蕩器；
c）高壓液相色譜儀（紫外檢測器）；
d）天平。
A.1.4 色譜條件
色譜柱：Kromasil-C18（0.4cm×25cm）；
流動相：65%甲醇-35%水（用磷酸調(diào)pH至3）；
流速：0.7 mL/min；
檢測器UV 270nm×0.1AUFS；
定量方法：外標(biāo)法（峰面積）。
A.1.5 步驟
A.1.5.1 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
精密稱取高良姜素、槲皮素、蘆丁、楊梅酮、莰菲醇、芹菜素、松屬素、柯因標(biāo)樣各2.0 mg于 50 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻備用。
A.1.5.2 樣品溶液的制備
稱取蜂膠樣品0.1g（精確到0.001 g），放入50 mL的容量瓶中，加入40mL甲醇，在超聲波水浴中加熱至60℃，振蕩 30 min，待樣品溶解后，用甲醇定容，用0.5mm的濾膜過濾，濾液用做上機(jī)分析。
A.1.5.3 測定
在上述色譜條件下，取10mL標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，得到色譜圖，重復(fù)進(jìn)樣6次，計算峰面積的平均值；在同一色譜條件下，取10mL樣品溶液進(jìn)行分析，外標(biāo)法計算樣品中各種黃酮的含量。
A.1.5.4 計算 （A.1）
式中：
C——每100g樣品中各種黃酮的含量，單位為毫克（mg）；
M——10mL標(biāo)準(zhǔn)樣品中各種黃酮的含量，單位為微克（mg）；
A2——10mL樣品溶液中各種相應(yīng)黃酮的峰面積平均值；
V2——樣品定容的體積，單位為微升（mL）；
W——樣品的稱取量，單位為克（g）；
A1——10mL標(biāo)準(zhǔn)溶液中各種黃酮的峰面積平均值；
V1——樣品的進(jìn)樣體積，單位為微升（mL）。
A.2 蜂膠氧化時間的測定
A.2.1 測定原理
高錳酸鉀是一種強(qiáng)氧化劑，在強(qiáng)酸性條件下其氧化性能最強(qiáng)， 離子在溶液中呈紫紅色被還原后因獲得5個電子生成Mn2+，溶液的色澤消失，其反應(yīng)式如下：
+8H++5e– Mn2++4H2O
（紫紅色） （無色）
蜂膠的化學(xué)組成極為復(fù)雜，現(xiàn)已從中成功地分離并鑒定出三百多種物質(zhì)，其中具有還原性能的不飽和醇、醛、酮、酸、黃酮、萜烯類等化合物就有一百多種，這些化合物與高錳酸鉀發(fā)生氧化–還原反應(yīng)后，高錳酸鉀被還原，從而使溶液的顏色由紫紅色變成無色。利用這一特性，每次測定同等質(zhì)量的蜂膠使?jié)舛群腕w積都固定的紫紅色高錳酸鉀液的顏色完全消退所需時間（用秒計），我們將其稱為該樣品的氧化時間。氧化時間短的蜂膠具有較強(qiáng)的抗氧化能力，比較所測定的蜂膠的抗氧化時即可對它們的質(zhì)量品質(zhì)做出相應(yīng)的判斷。
A.2.2 試劑
a）乙醇（95%）：分析純。
b）高錳酸鉀：分析純。配制成0.01 moL/L的高錳酸鉀液，即精確稱取3.160 g的高錳酸鉀，用水稀釋至1 L。
c）硫酸（95%～98%）：分析純。配制成20%的硫酸液。
d）蒸餾水。
A.2.3 設(shè)備和儀器
a）天平（感量0.001 g）。
b）電動粉碎機(jī)。
c）振蕩器。
d）秒表。
e）250 mL具塞磨口錐形瓶若干。
f）50 mL、100 mL、1 000 mL容量瓶若干。
g） 50 mL錐形瓶若干。
h） 0.2 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL移液管若干。
i） 漏斗、定量濾紙若干。
A.2.4 步驟
a）在室溫下，稱取1 g（精確到0.001 g）新鮮樣品，放入250 mL的具塞錐形瓶中，加入25mL乙醇，蓋好瓶塞，置于振蕩器上低速振蕩1 h，然后加入100 mL蒸餾水，充分搖勻后，過濾，收集濾液。
b）移液管吸取0.5 mL上述濾液，放入50 mL 的容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。
c）用移液管吸取10 mL稀釋液，放入50 mL 的錐形瓶中，加入2.0 mL20%的硫酸液，振蕩1 min，然后，用0.2 mL的吸量管加入0.05 mL 0.01 moL/L的高錳酸鉀液，在加入高錳酸鉀液的同時，開動秒表，當(dāng)溶液的紫紅色完全消退時，停止秒表，記錄溶液的紫紅色完全消退所耗用的時間（以秒計），即是該樣品的抗氧化時間。每一個樣品同時平行測定兩次，取算術(shù)平均值作為該樣品的測定值。
A.3 蜂膠中乙醇可溶物的含量測定
A.3.1 測定原理
蜂膠原料中含有的主要生物活性和制劑理作用含有能溶于75%的乙醇液，以此作為評定蜂膠原料質(zhì)量的一個指標(biāo)。測定時稱量試樣中不溶于75%乙醇部分的質(zhì)量，用減量法可得到溶于75%乙醇液的質(zhì)量，即是75%的乙醇提取物的質(zhì)量，計算其在試樣中的百分含量。
A.3.2 試劑
a）乙醇（95%）：分析純；
b）蒸餾水；
c）定量濾紙。
A.3.3 儀器與設(shè)備
a）天平（感量0.001 g）；
b）電動粉碎機(jī)；
c）鼓風(fēng)干燥箱；
d）自動振蕩器；
e）具塞磨口錐形瓶（250 mL）；
f）容量瓶（100 mL、500 mL）；
g）燒杯（100 mL、500 mL）；
h）瓷研缽；
i）波紋漏斗（?12 cm）。
A.3.4 方法和步驟
a）配制75%乙醇液；
b）稱取10 g（精確到0.001 g）蜂膠試樣放入研缽本，加入50 mL75%的乙醇液，研磨成糊狀，將糊狀物移入錐形瓶內(nèi)，用少量乙醇液分三次沖洗研缽，沖洗液合并于錐形瓶內(nèi)，使乙醇液的體積達(dá)到150 mL，蓋好瓶塞，將此瓶置于振蕩器上，室溫條件下每隔1 h振蕩30 min，浸提時間不得少于24 h；
c）取一張預(yù)先稱重的濾紙置于漏斗內(nèi)，將上述提取液過濾于另一個錐形瓶中，再用少量乙醇分三次沖洗原錐形瓶及濾紙，不溶物及濾紙室溫晾干后，放入鼓風(fēng)干燥葙內(nèi)50℃干燥至恒重，稱重，計算乙醇提取物的質(zhì)量。在相同條件下做三次平行試驗。
A.3.5 計算方式 （A.2）
式中：
X1——樣品中乙醇提取物的含量，%；
W——樣品質(zhì)量，g；
W1——不溶物質(zhì)量，g；
平行試驗允許的誤差不超過1.5%，取三次測定的平均值。
A.4 蜂蠟和不溶物的含量測定
從本標(biāo)準(zhǔn)A.3中測得蜂膠的乙醇提取物含量，再運用減量法，求得蜂蠟和不溶物的含量，具體計算公式如下：  X1=100%–X2 （A.3）
式中：
X1——蜂蠟和不溶物含量，%；
X2——乙醇提取物含量，%。
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了無公害蜂膠的定義、質(zhì)量要求、檢驗方法、檢驗規(guī)則、標(biāo)志、包裝 運輸、貯存要求。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于蜂膠的生產(chǎn)、加工和銷售。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB 4789.2 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定
GB 4789.3 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 大腸菌群測定
GB 4789.4 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗
GB 4789.5 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 志賀氏菌檢驗
GB 4789.10 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗
GB 4789.11 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 溶血性鏈球菌檢驗
GB 4789.15 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 霉菌和酵母計數(shù)
GB/T 5009.11 食品中總砷的測定方法
GB/T 5009.12 食品中鉛的測定方法
GB/T 5009.17 食品中總汞的測定方法
GB/T 5009.19 食品中六六六、滴滴涕殘留量的測定方法
GB 15204 食品容器、包裝材料用偏氯乙烯–氯乙烯共聚樹脂衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
GB 16331 食品包裝材料用尼龍 6樹脂衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
GB 16332 食品包裝材料用尼龍成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
GB/T 17332 食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)制劑多種殘留的測定
3 術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
3.1 蜂膠 propolis
蜜蜂將采自植物的枝條、葉芽及愈傷組織等的分泌物與上腭腺、蠟腺等的分泌物同少量花粉混合后所形成的粘性物質(zhì)。
3.2 總黃酮 total flavonoids
蜂膠中黃酮及類黃酮類物質(zhì)的含量總和。本標(biāo)準(zhǔn)是以蜂膠中常見的高良姜素（galangin）、槲皮素（quercetin）、蘆?。╮utin）、楊梅酮（myricetin）、莰菲醇（kaempferol）、芹菜素（apigenin）、松屬素（pinocembrin）、柯因（chrysine）等 8種黃酮含量之和表示。
3.3 氧化時間 oxidation time
蜂膠的綜合抗氧化能力（即綜合還原能力），通常指一定量的蜂膠使一定體積的濃度為0.01moL的高錳酸鉀液的紫紅色完全消退所需時間，用秒來計量。
4 質(zhì)量要求
4.1 感官指標(biāo)
無公害蜂膠的感官指標(biāo)應(yīng)符合表1的規(guī)定。
表1 感 官 指 標(biāo)
狀 態(tài) 不透明的團(tuán)塊或碎片，在35℃以上逐漸變軟，有粘性和可塑性
氣 味 有明顯的芳香味
色 澤 褐色、灰褐、暗綠、灰黑色等，有光澤
滋 味 有明顯的辛辣感
4.2 理化指標(biāo)
無公害蜂膠的理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。
表2 理 化 指 標(biāo)
項 目 指 標(biāo)
總黃酮含量/（%） ≥8
氧化時間/s ≤22
75%乙醇提取物含量/（%） ≥55
蜂蠟和75%乙醇不溶物含量/（%） ≤45
4.3 微生物指標(biāo)
無公害蜂膠原料的微生物指標(biāo)應(yīng)符合表3的規(guī)定。
表3 蜂膠的微生物指標(biāo)
項 目 指 標(biāo)
菌落總數(shù)/（cfu/g） ≤1000
大腸菌群/（MPN/100g） ≤30
霉菌及酵母菌數(shù)/（cfu/g） ≤200
致病菌 不得檢出
4.4 有毒有害物質(zhì)限量
無公害蜂膠原料的有毒有害物質(zhì)限量應(yīng)符合表4規(guī)定。
表4 有毒有害物質(zhì)限量
項 目 指 標(biāo)
鉛（以Pb計）/（mg/kg） ≤1
砷（以As計）/（mg/kg） ≤0.3
汞/（mg/kg） ≤0.3
六六六/（mg/kg） ≤0.05
滴滴涕/（mg/kg） ≤0.05
氟胺氰菊脂/（mg/kg） ≤0.05
5 檢驗方法
5.1 抽樣與取樣
5.1.1 抽樣方法
每批20件以下者，抽樣件數(shù)不少于50%；20件以上者，每增加10件，增抽樣品一件。
5.1.2 取樣方法
隨機(jī)從包裝中取出蜂膠若干，對于塊狀蜂膠，用工具從不同的膠塊的不同部位上采取5g～10g樣品，每一批的取樣總量不超過300g。將塊狀的樣品放入3℃～10℃的冰箱中1 h后，取出樣品，用電動粉碎機(jī)將其粉碎成粉狀。
5.2 感官檢驗
5.2.1 色澤
將蜂膠塊冷凍后，用錘砸開，在自然光的環(huán)境中觀察外表及斷面的光澤度。
5.2.2 黏性
將蜂膠塊（沫）加熱至35℃～60℃以上，用于揉搓成條，再慢慢向兩端拉伸。含膠量越大，黏性越大，拉伸長度亦越大。
5.2.3 氣味、滋味
取2g試樣置于一的玻璃板上，先口嘗蜂膠的滋味，再點燃，嗅其氣味是否異常。
5.3 理化檢驗
5.3.1 蜂膠總黃酮含量的測定（見附錄A）。
5.3.2 蜂膠抗氧化時間的測定（見附錄A）。
5.3.3 蜂膠中乙醇可溶物的含量測定（見附錄A）。
5.3.4 蜂蠟和不溶物的含量測定（見附錄A）。
5.4 微生物檢驗
5.4.1 菌落總數(shù)
按GB 4789.2規(guī)定的方法測定
5.4.2 大腸菌群
按GB 4789.3規(guī)定的方法測定
5.4.3 霉菌及酵母計數(shù)
按GB 4789.15規(guī)定的方法測定
5.4.4 致病菌
按GB 4789.4、GB 4789.5、GB 4789.10、GB 4789.11規(guī)定的方法測定。
5.5 有毒有害物質(zhì)檢驗
5.5.1 六六六、滴滴涕
按GB/T 5009.19規(guī)定的方法測定。
5.5.2 氟胺氰菊酯
按GB/T 17331規(guī)定的方法測定。
5.6 鉛、砷、汞
分別按GB/T 5009.12、GB/T 5009.11、GB/T 5009.17規(guī)定的方法測定。
6 檢驗規(guī)則
6.1 組批規(guī)則
6.1.1 產(chǎn)品均應(yīng)以批為單位，同批產(chǎn)品的品質(zhì)、規(guī)格、包裝應(yīng)整齊一致。
6.1.2 同一班次，用同一原料、按同一過程所生產(chǎn)的同規(guī)格產(chǎn)品為一個貨批。
6.2 檢驗類型
6.2.1 型式檢驗
型式檢驗是對產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行全面考核，即對本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的全部要求（指標(biāo)）進(jìn)行檢驗。有下列情形之一者應(yīng)對產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行型式檢驗：
a）產(chǎn)品出口、評優(yōu)或國家質(zhì)量監(jiān)督機(jī)構(gòu)、行業(yè)主管部門提出型式檢驗要求；
b）前后兩次抽樣檢驗結(jié)果差異較大；
c）因人為或自然因素使生產(chǎn)環(huán)境發(fā)生較大變化。
6.2.2 交收檢驗
每批產(chǎn)品交收（出廠）前，生產(chǎn)單位都要進(jìn)行感官、標(biāo)志和包裝等的檢驗，檢驗合格后并附合格證的產(chǎn)品方可交收（出廠）。
6.2.3 包裝檢驗
應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)第8章的規(guī)定進(jìn)行。
6.3 抽樣方法
抽樣應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)5.1.1的規(guī)定，從每一批貨中隨機(jī)抽取樣品。
6.4 判定規(guī)則
6.4.1 檢驗結(jié)果全部符合本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的產(chǎn)品為合格。
6.4.2 產(chǎn)品中某一項指標(biāo)不符合要求的，允許對不合格項目進(jìn)行加密取樣復(fù)測，復(fù)測仍不合格的，則判定該批產(chǎn)品為不合格。
6.4.3 該批次樣本標(biāo)志、包裝、凈含量不合格者，允許生產(chǎn)單位進(jìn)行整改后申請復(fù)檢一次。若檢驗結(jié)果中出現(xiàn)不符合本標(biāo)準(zhǔn)衛(wèi)生安全、有毒有害規(guī)定的指標(biāo)、允許復(fù)檢一次，復(fù)檢應(yīng)取同一批產(chǎn)品中副樣進(jìn)行以復(fù)檢結(jié)果為準(zhǔn)。感官和衛(wèi)生指標(biāo)檢測不合格不得復(fù)檢。
7 標(biāo)志
7.1 食品標(biāo)簽
應(yīng)符合GB 7718的要求，且標(biāo)明產(chǎn)品的食用量。運輸包裝上的標(biāo)志應(yīng)與食品標(biāo)簽一致。
7.2 圖示標(biāo)志
應(yīng)符合GB 191的要求。
8 包裝、運輸、貯存
8.1 包裝
8.1.1 包裝材料應(yīng)符合食品衛(wèi)生安全標(biāo)準(zhǔn)要求。
8.1.2 包裝應(yīng)牢固、防潮、整潔，便于裝卸、倉儲和運輸。
8.1.3 產(chǎn)品應(yīng)按產(chǎn)地、規(guī)格分別包裝。
8.2 運輸
8.2.1 運輸時應(yīng)做到運輸工具清潔衛(wèi)生、干燥、無異味、無污染，嚴(yán)禁與有毒、有害、有異味、易污染的物品混裝混運。
8.2.2 運輸途中嚴(yán)防日曬、雨淋，裝卸時應(yīng)輕放輕卸。
8.3 貯存
8.3.1 臨時或短期貯存，應(yīng)以防涼干燥、清潔衛(wèi)生的場所為宜，嚴(yán)禁日曬、雨淋及有毒有害物質(zhì)的污染。
8.3.2 長時間存放，應(yīng)按產(chǎn)品等級、規(guī)格分別堆放，保持貯存場所陰涼干燥。
8.3.3 產(chǎn)品不得與有毒、有害、有異味的物品同處貯存。
附 錄 A
（規(guī)范性附錄）
蜂膠的理化指標(biāo)檢測方法
A.1 蜂膠總黃酮含量的測定
A.1.1 原理
母核上羥基、甲氧基、糖甙元的個數(shù)不同，而形成一系列黃酮和黃酮甙。蜂膠中常見的黃酮是以下8種：高良姜素、槲皮素、蘆丁、楊梅酮、莰菲醇、芹菜素、松屬素、柯因。在紫外波長270 nm處均有吸收。這8種黃酮的分子中因含有羥基的數(shù)量不同因而極性不同，在反向C18柱上的保留時間不同，隨著羥基個數(shù)的減少其保留時間增加。因此8種黃酮出峰的順序應(yīng)是蘆丁→楊梅酮→槲皮素→莰菲醇→芹菜素→松屬素→柯因→高良姜素。用反向高效液相色譜法測定蜂膠中的黃酮含量，快速、準(zhǔn)確、精密度高。
A.1.2 試劑
a）高良姜素，槲皮素，蘆丁，楊梅酮，莰菲醇，芹菜素，松屬素，柯因（色譜純，Sigma公司）。
b）甲醇（優(yōu)級純，并經(jīng)0.5mm濾膜過濾）、乙醇、磷酸（優(yōu)析純）、蒸餾水（重蒸，并經(jīng)0.45mm濾膜過濾）。
A.1.3 設(shè)備和儀器
a）超聲波水??；
b）振蕩器；
c）高壓液相色譜儀（紫外檢測器）；
d）天平。
A.1.4 色譜條件
色譜柱：Kromasil-C18（0.4cm×25cm）；
流動相：65%甲醇-35%水（用磷酸調(diào)pH至3）；
流速：0.7 mL/min；
檢測器UV 270nm×0.1AUFS；
定量方法：外標(biāo)法（峰面積）。
A.1.5 步驟
A.1.5.1 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
精密稱取高良姜素、槲皮素、蘆丁、楊梅酮、莰菲醇、芹菜素、松屬素、柯因標(biāo)樣各2.0 mg于 50 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻備用。
A.1.5.2 樣品溶液的制備
稱取蜂膠樣品0.1g（精確到0.001 g），放入50 mL的容量瓶中，加入40mL甲醇，在超聲波水浴中加熱至60℃，振蕩 30 min，待樣品溶解后，用甲醇定容，用0.5mm的濾膜過濾，濾液用做上機(jī)分析。
A.1.5.3 測定
在上述色譜條件下，取10mL標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，得到色譜圖，重復(fù)進(jìn)樣6次，計算峰面積的平均值；在同一色譜條件下，取10mL樣品溶液進(jìn)行分析，外標(biāo)法計算樣品中各種黃酮的含量。
A.1.5.4 計算 （A.1）
式中：
C——每100g樣品中各種黃酮的含量，單位為毫克（mg）；
M——10mL標(biāo)準(zhǔn)樣品中各種黃酮的含量，單位為微克（mg）；
A2——10mL樣品溶液中各種相應(yīng)黃酮的峰面積平均值；
V2——樣品定容的體積，單位為微升（mL）；
W——樣品的稱取量，單位為克（g）；
A1——10mL標(biāo)準(zhǔn)溶液中各種黃酮的峰面積平均值；
V1——樣品的進(jìn)樣體積，單位為微升（mL）。
A.2 蜂膠氧化時間的測定
A.2.1 測定原理
高錳酸鉀是一種強(qiáng)氧化劑，在強(qiáng)酸性條件下其氧化性能最強(qiáng)， 離子在溶液中呈紫紅色被還原后因獲得5個電子生成Mn2+，溶液的色澤消失，其反應(yīng)式如下：
+8H++5e– Mn2++4H2O
（紫紅色） （無色）
蜂膠的化學(xué)組成極為復(fù)雜，現(xiàn)已從中成功地分離并鑒定出三百多種物質(zhì)，其中具有還原性能的不飽和醇、醛、酮、酸、黃酮、萜烯類等化合物就有一百多種，這些化合物與高錳酸鉀發(fā)生氧化–還原反應(yīng)后，高錳酸鉀被還原，從而使溶液的顏色由紫紅色變成無色。利用這一特性，每次測定同等質(zhì)量的蜂膠使?jié)舛群腕w積都固定的紫紅色高錳酸鉀液的顏色完全消退所需時間（用秒計），我們將其稱為該樣品的氧化時間。氧化時間短的蜂膠具有較強(qiáng)的抗氧化能力，比較所測定的蜂膠的抗氧化時即可對它們的質(zhì)量品質(zhì)做出相應(yīng)的判斷。
A.2.2 試劑
a）乙醇（95%）：分析純。
b）高錳酸鉀：分析純。配制成0.01 moL/L的高錳酸鉀液，即精確稱取3.160 g的高錳酸鉀，用水稀釋至1 L。
c）硫酸（95%～98%）：分析純。配制成20%的硫酸液。
d）蒸餾水。
A.2.3 設(shè)備和儀器
a）天平（感量0.001 g）。
b）電動粉碎機(jī)。
c）振蕩器。
d）秒表。
e）250 mL具塞磨口錐形瓶若干。
f）50 mL、100 mL、1 000 mL容量瓶若干。
g） 50 mL錐形瓶若干。
h） 0.2 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL移液管若干。
i） 漏斗、定量濾紙若干。
A.2.4 步驟
a）在室溫下，稱取1 g（精確到0.001 g）新鮮樣品，放入250 mL的具塞錐形瓶中，加入25mL乙醇，蓋好瓶塞，置于振蕩器上低速振蕩1 h，然后加入100 mL蒸餾水，充分搖勻后，過濾，收集濾液。
b）移液管吸取0.5 mL上述濾液，放入50 mL 的容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。
c）用移液管吸取10 mL稀釋液，放入50 mL 的錐形瓶中，加入2.0 mL20%的硫酸液，振蕩1 min，然后，用0.2 mL的吸量管加入0.05 mL 0.01 moL/L的高錳酸鉀液，在加入高錳酸鉀液的同時，開動秒表，當(dāng)溶液的紫紅色完全消退時，停止秒表，記錄溶液的紫紅色完全消退所耗用的時間（以秒計），即是該樣品的抗氧化時間。每一個樣品同時平行測定兩次，取算術(shù)平均值作為該樣品的測定值。
A.3 蜂膠中乙醇可溶物的含量測定
A.3.1 測定原理
蜂膠原料中含有的主要生物活性和制劑理作用含有能溶于75%的乙醇液，以此作為評定蜂膠原料質(zhì)量的一個指標(biāo)。測定時稱量試樣中不溶于75%乙醇部分的質(zhì)量，用減量法可得到溶于75%乙醇液的質(zhì)量，即是75%的乙醇提取物的質(zhì)量，計算其在試樣中的百分含量。
A.3.2 試劑
a）乙醇（95%）：分析純；
b）蒸餾水；
c）定量濾紙。
A.3.3 儀器與設(shè)備
a）天平（感量0.001 g）；
b）電動粉碎機(jī)；
c）鼓風(fēng)干燥箱；
d）自動振蕩器；
e）具塞磨口錐形瓶（250 mL）；
f）容量瓶（100 mL、500 mL）；
g）燒杯（100 mL、500 mL）；
h）瓷研缽；
i）波紋漏斗（?12 cm）。
A.3.4 方法和步驟
a）配制75%乙醇液；
b）稱取10 g（精確到0.001 g）蜂膠試樣放入研缽本，加入50 mL75%的乙醇液，研磨成糊狀，將糊狀物移入錐形瓶內(nèi)，用少量乙醇液分三次沖洗研缽，沖洗液合并于錐形瓶內(nèi)，使乙醇液的體積達(dá)到150 mL，蓋好瓶塞，將此瓶置于振蕩器上，室溫條件下每隔1 h振蕩30 min，浸提時間不得少于24 h；
c）取一張預(yù)先稱重的濾紙置于漏斗內(nèi)，將上述提取液過濾于另一個錐形瓶中，再用少量乙醇分三次沖洗原錐形瓶及濾紙，不溶物及濾紙室溫晾干后，放入鼓風(fēng)干燥葙內(nèi)50℃干燥至恒重，稱重，計算乙醇提取物的質(zhì)量。在相同條件下做三次平行試驗。
A.3.5 計算方式 （A.2）
式中：
X1——樣品中乙醇提取物的含量，%；
W——樣品質(zhì)量，g；
W1——不溶物質(zhì)量，g；
平行試驗允許的誤差不超過1.5%，取三次測定的平均值。
A.4 蜂蠟和不溶物的含量測定
從本標(biāo)準(zhǔn)A.3中測得蜂膠的乙醇提取物含量，再運用減量法，求得蜂蠟和不溶物的含量，具體計算公式如下：  X1=100%–X2 （A.3）
式中：
X1——蜂蠟和不溶物含量，%；
X2——乙醇提取物含量，%。
