美洲幼蟲腐臭病(AFB)是由革蘭氏陽性細(xì)菌類幼蟲芽孢桿菌(Pacnibacillus larvae)引起的蜜蜂幼蟲病害。由于它的芽抱能長時(shí)間存活，因此該病難以防治。以往常用土霉素防治，目前在美國、加拿大和阿根廷已出現(xiàn)抗四環(huán)素的菌株；其他抗生素如泰樂菌素和林肯霉素也能有效防治，但卻沒有關(guān)于替米考星(Tilmicosin)防治美幼病的信息。替米考星是一種由泰樂菌素半合成的大環(huán)內(nèi)酯類藥物，是動(dòng)物專用抗生素。阿根廷研究人員設(shè)計(jì)了三方面的實(shí)驗(yàn)，一是檢測23株不同地域的芽抱桿菌對(duì)替米考星的抗性或敏感性；二是檢測該抗生素對(duì)成年蜂和蜜蜂幼蟲的毒性；三是用田間試驗(yàn)評(píng)價(jià)該抗生素對(duì)感染AFB蜂群的防治效果。

實(shí)驗(yàn)用的23株類幼蟲芽孢桿菌分別來自患病蟲尸和蜂蜜樣品，其中3株對(duì)四環(huán)素具有抗性。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容之一為敏感性實(shí)驗(yàn)：一是利用瓊脂稀釋技術(shù)對(duì)替米考星最低抑菌濃度(MIC)進(jìn)行檢測，濃度分別為0.0078、0.015、0.0313、0.0625、0.125、0.25、0.5和1 μg/mg培養(yǎng)基，37.8℃ 培養(yǎng)48 h；二是瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(ADT)，將含有替米考星15、10和5μg的濾紙片分別放于涂布芽孢桿菌的營養(yǎng)瓊脂平板中央，37.8℃培養(yǎng)48 h，然后測量抑菌圈的直徑，判斷該抗生素對(duì)菌株的抑制作用。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容之二為成年蜂口服急性中毒測試和對(duì)蜜蜂幼蟲毒性的田間試驗(yàn)，其中前者測試濃度為50、100、200和400 μg/只成年蜂，用樂果作為毒性對(duì)照，50％蔗糖溶液作為空白對(duì)照。在24、48和72 h統(tǒng)計(jì)死亡率，并計(jì)算成年蜂死亡一半時(shí)對(duì)應(yīng)的劑量(LD50)；后者用12群意蜂，每群2萬只成年蜂，2張子脾，6框蜂和2張蜜粉脾，測試組分別為含有l(wèi) g替米考星的糖45 g＋5 g櫻桃軟糖(作引誘劑)47 g水和含有1.25 g鹽酸土霉素的糖45 g＋45 g櫻桃軟糖，包于紙包中飼喂，，每群標(biāo)記136個(gè)幼蟲房(1～5日齡)，并在給藥后7 d 和21 d計(jì)錄卵、末封蓋幼蟲、封蓋幼蟲和空房數(shù)量，統(tǒng)計(jì)死亡幼蟲。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容之三為檢測田間效果，用30群蜂，每群1.8萬只成年蜂，5張子脾(3張末封蓋和2張封蓋)，2張蜜粉脾和3張巢礎(chǔ)，進(jìn)行AFB病原接種，蜂群感染AFB的臨床表現(xiàn)由Alippi等設(shè)計(jì)的7水平法表示，進(jìn)而對(duì)比替米考星與泰樂菌素、林肯霉素和應(yīng)用最廣的土霉素的防治效果。用30群蜂，6種處理方式，分別是含有1 g替米考星的糖45 g＋45 g櫻桃軟糖＋5 g滅菌水，含有1.25 g鹽酸土霉素的糖48 g＋5 g櫻桃軟糖，泰樂菌素酒石酸鹽和林肯霉素按土霉素的方法配制，不加抗生素的糖紙包作為空白對(duì)照，這些處理是在蜂群感染美幼病30 d后進(jìn)行的。每2周評(píng)估一次，共150 d，并通過統(tǒng)計(jì)分析進(jìn)行AFB感染程度的比較。

根據(jù)上述三方面的實(shí)驗(yàn)得出所有供試菌株均對(duì)替米考星高度敏感，其中MIC值為0.0625～0.5 μg/mL，另外，使50％和90％的菌株受抑制的MIC值(MIC50和MIC90)為0.25 μm/mL；瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)得出所有供試菌株對(duì)替米考星敏感，含有15 μm 的替米考星濾紙片對(duì)應(yīng)的抑菌圈直徑為21～50 mm；通過口服急性中毒試驗(yàn)得知，替米考星對(duì)成年蜂在24、48 和 72 h 的LD50分別為10478.438、1539.876和1316.164 μm/只蜜蜂，而樂果的LD50分別為0.324，0.198和0.158 μm/只 蜜蜂；由蜜蜂幼蟲的毒性實(shí)驗(yàn)得知，經(jīng)替米考星處理的蜂群死亡率為13％。14％，這與健康蜂群的正常死亡率14％相一致，泰樂菌素和林肯霉素對(duì)應(yīng)死亡率為12％～26％，并且替米考星較土霉素安全，而土霉素有傷蜂現(xiàn)象?？梢娞婷卓夹菍?duì)成年蜂和蜜蜂幼蟲均無毒性。將含有1 g替米考星的糖飼喂感染美幼病的蜂群，在60天后，與未處理的蜂群對(duì)比，可觀測到加入替米考星的蜂群病情癥狀受抑制，這是對(duì)替米考星抑制美幼病的首次報(bào)道。其中重要的是3株對(duì)四環(huán)素有抗性的類幼蟲芽抱桿菌均對(duì)替米考星高度敏感，MIC值為0.0625 μg/mL，另外4株對(duì)四環(huán)素中度敏感的類幼蟲芽孢桿菌也均對(duì)替米考星敏感。根據(jù)田間實(shí)驗(yàn)結(jié)果和對(duì)幼蟲與成年蜂無毒情況進(jìn)行分析，得知替米考星與泰樂菌素效果相似。

目前主要用抗生素來防治蜜蜂(幼蟲)細(xì)菌病，其中在對(duì)美(歐)幼病的防治方面，加拿大和阿根廷用土霉素，美國用四環(huán)素和泰樂菌素，墨西哥用鏈霉素和磺胺類藥物。歐洲不允許在蜂群中使用抗生素。目前，在養(yǎng)蜂業(yè)中備受關(guān)注的是食用蜂蜜藥物殘留問題，鑒于這種考慮，應(yīng)該鼓勵(lì)養(yǎng)蜂者采用衛(wèi)生管理等措施來綜合處理幼蟲病害。此外，應(yīng)禁止在流蜜期使用上述化合物，以減少抗性菌株的產(chǎn)生和抗生素在蜂蜜中的殘留。

吳艷艷 譯

《中國蜂業(yè)》2009，60（6）