摘要：本文對蜜蜂白堊病的病原、培養(yǎng)條件、發(fā)生和發(fā)展以及防治方法等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

關(guān)鍵詞：蜜蜂白堊病，蜜蜂球囊菌，研究進(jìn)展

蜜蜂白堊病（Bee Chalkbrood Disease）是由蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)寄生而引起蜜蜂幼蟲死亡的真菌性傳染病[1]。該病最早由Priss博士在德國發(fā)現(xiàn)，1963年以前主要發(fā)生在歐洲各國[2]。1981年在第28屆國際養(yǎng)蜂大會上，將這種蜜蜂真菌病正式定名為蜜蜂球囊菌病——白堊病[3]。1985年在日本召開的世界養(yǎng)蜂大會特將蜜蜂白堊病列為學(xué)術(shù)會議的主要議題。后來，隨著蜜蜂原種的引進(jìn)，才使此病傳至我國，到九十年代，全國的意大利蜜蜂蜂群發(fā)病率達(dá)30%～40%[4]。

自從發(fā)現(xiàn)了這種蜜蜂疾病以后，世界各國的科研工作者做了大量的研究工作，研究的方面包括：病原的生物學(xué)特性[5]，最適培養(yǎng)條件[6]，該病的發(fā)病情況[7]，流行規(guī)律[8]，病理組織學(xué)[9]，病情的診斷方式以及藥物防治[10]等各個方面。特別是近幾年，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，一些現(xiàn)代化的研究手段也應(yīng)用于了這種疾病的研究，但非常遺憾的是，到目前為止，仍然沒有研制出防治此病的特效藥物。近期，未見此病大規(guī)模侵害蜜蜂的報道，但它作為一種真菌傳染病，有其發(fā)病的周期性。所以加強(qiáng)蜜蜂白堊病的研究還是非常有必要的。本文對國內(nèi)外白堊病的近期研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，以期對此病的科研工作提供一些借鑒和促進(jìn)作用。

1 病原

當(dāng)發(fā)現(xiàn)一種新的疾病以后，科研工作者首先要做的就是尋找這種疾病的致病原因，也就是病原，研究一下到底是什么東西導(dǎo)致了這種疾病的發(fā)生。蜜蜂白堊病的研究也是這樣：1911年，Priss發(fā)現(xiàn)了這種疾病，但沒有進(jìn)行詳細(xì)的描述，只是觀察到了后來被命名為蜜蜂白堊病的一些癥狀。到了1913年，Massen第一次報道了對白堊病的觀察，同時他把此種疾病的病原菌命名為蜜蜂黑囊霉（Pericystis apis）. Maurizio(1934,1935)發(fā)現(xiàn)了兩種形態(tài)不同的蜜蜂黑囊菌。這兩種真菌不能雜交。一種為引起白堊病的變種，孢囊較小；另一種不引起白堊病，有較大的孢囊及菌柄。A.M.斯米諾夫在1985年通過對病原形態(tài)的觀察，發(fā)現(xiàn)了蜜蜂球囊菌的2個亞種。即蜜蜂球囊霉蜜蜂變種（Ascosphaera apis var.apis）(模式變種)與蜜蜂球囊霉大孢變種（Ascosphaera apis var.major）。這兩個變種的主要區(qū)別在于成熟的滋養(yǎng)細(xì)胞和孢囊的大小不同，以及這兩個類型間彼此不能雜交[11]。

到了近代，科研者們也對此病的病原進(jìn)行了研究，也是主要涉及病原的形態(tài)觀察方面。邵瑞宜等[2]和余林生等[5]分別對福建和安徽的蜜蜂球囊菌進(jìn)行了觀察，測量了菌絲直徑，孢囊直徑，孢子球直徑和孢子球的長寬比等。同時他們把自己的研究結(jié)果同中外學(xué)者對白堊病病原菌的菌絲、孢囊、孢子球直徑及孢子大小等進(jìn)行的研究的結(jié)果進(jìn)行了比較。發(fā)現(xiàn)他們測得的數(shù)據(jù)中菌絲直徑、孢囊的直徑及范圍、孢子球的直徑及范圍與有關(guān)報道相似或極為相似。

2003年，Pawe Chorbiński和Krzysztof Rypu?a對自己分離得到的一株蜜蜂球囊菌利用掃描電子顯微鏡對菌絲、未成熟及成熟孢子和孢囊進(jìn)行了觀察，并且拍攝了精美的電子照片，他們發(fā)現(xiàn)自己的結(jié)果能夠很好的驗證前人應(yīng)用普通的觀察方法觀察到的結(jié)果，于是他們得出結(jié)論，利用掃描電子顯微鏡可以用來鑒定蜜蜂球囊菌[12]。除了利用光學(xué)和電子顯微鏡來進(jìn)行球囊菌菌種的鑒定以外，也有報道稱，可以利用RAPD[13]及PCR[14]等現(xiàn)代分子生物學(xué)方法[15]進(jìn)行菌種的鑒定。1996年，Rui Lu, D. Wayne Goerzen, and Gerald H. Rank 成功的利用RAPD技術(shù)對侵染切葉蜂的球囊菌的兩個相近種進(jìn)行了區(qū)分。R.R.James and J.S.Skinner根據(jù)球囊菌種的特異性引物，體外擴(kuò)增出了球囊菌的基因序列，這種方法的應(yīng)用，使得在蜜蜂球囊菌的種系鑒定方面提供了方便和可靠的途徑。

2 培養(yǎng)條件

要想在實驗室條件下進(jìn)行人工培養(yǎng)球囊菌，以獲得更多的菌絲和分生孢子，為進(jìn)一步的科學(xué)研究提供材料，就必須對它的培養(yǎng)條件進(jìn)行研究[16]。蜜蜂白堊病一般多發(fā)生在春季及初夏，氣候多雨潮濕，溫度不穩(wěn)，變化頻繁。因此，有人提出溫度和濕度是影響白堊病病原球囊菌生長的主要因素。

有報道稱，在l1～37℃范圍內(nèi)都能產(chǎn)生孢子囊，其最適溫度為30℃。而孢子萌發(fā)的最佳溫度為20～25℃。濕度影響孢子萌發(fā)的有關(guān)資料很少，曾有報道說溫度為30℃時貯蜜含水量在21．5％以上容易發(fā)生白堊病，而當(dāng)貯蜜含水量低至19.5％ ～21.5％時，白堊病就停止發(fā)展。

梁勤等[6]在前人的研究成果的基礎(chǔ)上,系統(tǒng)地研究蜜蜂球囊菌孢子萌發(fā)的3個階段(活化、膨大、產(chǎn)生萌發(fā)管)分別對溫度、相對濕度和pH等3個主要生態(tài)因子的要求。結(jié)果表明,孢子活化和膨大在15～40±0.5℃和25～40±0.5℃范圍內(nèi)受溫度的影響不明顯( P>0.05)；萌發(fā)管盡管在25～37±0.5℃之間均可發(fā)生,而最適溫度位于35±0.5℃。相對濕度越大,越有利于孢子萌發(fā),而相對濕度低于80%對孢子萌發(fā)極為不利。孢子萌發(fā)的3個階段在pH為5～7.8時幾乎不受pH變化的影響,而在pH值較低時影響很大。有此他們得出結(jié)論： A .apis 是一種生態(tài)位高度吻合的蜜蜂幼蟲病原體。

除了研究環(huán)境因子對蜜蜂球囊菌的生長影響以外，也有不少科研人員對營養(yǎng)生態(tài)條件進(jìn)行了研究。梁勤[17]等從碳源、氮源、維生素、礦質(zhì)元素等方面研究了營養(yǎng)生態(tài)條件對蜜蜂球囊菌生長及產(chǎn)孢的影響。結(jié)果表明，營養(yǎng)生態(tài)條件的變化對蜜蜂球囊菌的影響極大。菌絲體生長最好的碳源是果糖。產(chǎn)孢量最高的是葡萄糖，不利用山梨糖和甘露糖；該菌優(yōu)先利用有機(jī)氮源，不利用無機(jī)氮源中NaNO2、H2NCSNH；維生素對A．a(chǎn)pis產(chǎn)孢量有極為顯著的影響，復(fù)合維生素比單一維生素能更好地促進(jìn)菌絲體生長。尤其對產(chǎn)孢更為有利；礦質(zhì)元素中Mg2+、P5+、K+、Zn2+促進(jìn)菌絲體生長和孢子的形成，Na+對菌絲體的生長有抑制作用。

3 病害的發(fā)生和發(fā)展

研究蜜蜂白堊病的發(fā)生和發(fā)展規(guī)律，可以從中找到球囊菌的致病機(jī)理，為白堊病的防治提供理論參考。同一蜂群中,雄蜂幼蟲比工蜂幼蟲易發(fā)生白堊病,雄蜂幼蟲3～4日齡,工蜂幼蟲4～5日齡最易感染該病[18]。白堊病的發(fā)病季節(jié)明顯多在春季和初夏[19]。蜂群中飼料不足或劣質(zhì),?？梢姷接紫x發(fā)育不良,采集力和抗病力明顯下降。在遇到外界環(huán)境急劇變化,如長期陰雨,持續(xù)高溫,農(nóng)藥中毒等,很容易感染白堊病。飼養(yǎng)管理過程中不重視衛(wèi)生操作規(guī)程,對蜂場蜂具沒有消毒或消毒不嚴(yán)格,或隨意調(diào)換來路不明的蜂具與飼料,易引起白堊病或發(fā)病率高。

蜂群間白堊病的傳播主要靠孢子，蜜蜂幼蟲吞食了病原菌孢子之后，孢子進(jìn)入腸道，并在其中萌發(fā)和生長。對于球囊菌是如何侵入蜜蜂機(jī)體和蜜蜂感染了白堊病以后的病態(tài)發(fā)展過程，國內(nèi)外很多學(xué)者也做了研究[20]。

余林生等[7]將產(chǎn)生孢囊的菌絲混于天然花粉與蜂蜜中,制成懸浮液。然后分別喂飼蜜蜂工蜂和雄蜂幼蟲，并以健康的幼蟲做對照。經(jīng)過觀察他們發(fā)現(xiàn)：第1 d和第2 d無異常,感染幼蟲與健康幼蟲無明顯區(qū)別;第3 d有少數(shù)工蜂幼蟲體壁長出白色菌絲,為典型白堊病癥狀,而雄蜂幼蟲多數(shù)出現(xiàn)白堊病癥狀;第4 d多數(shù)工蜂出現(xiàn)白堊病癥狀;多數(shù)患病幼蟲在第5 d死亡。雖然他們對蜜蜂感染白堊病以后的病態(tài)發(fā)展過程進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但是沒有對病原菌侵染蜜蜂機(jī)體的具體過程進(jìn)行敘述。

Pawe Chorbiński[21]對侵染過程進(jìn)行了詳細(xì)的研究和描述，并且利用電子顯微鏡拍攝到了非常好的組織圖片，他在自己的論文中提到：球囊菌是引起蜜蜂白堊病的病因，用在3 ul 35%的含有5×105個孢子的蔗糖稀釋液，飼喂三日齡的蜜蜂幼蟲，然后利用組織學(xué)的方法，對球囊菌侵入蜜蜂機(jī)體的詳細(xì)過程進(jìn)行了研究。在蜜蜂的中腸中發(fā)現(xiàn)了球囊菌孢子，新生長出來的菌絲侵入圍食膜，上皮細(xì)胞和基底膜，三天之后菌絲在脂肪體和其它的幼蟲組織內(nèi)生長，在接下來的兩天里，菌絲體穿過幼蟲的體壁，開始向空氣中生長，在第六天的時候第一次觀察到了第一批孢子囊。最后他指出沒有在蜜蜂的氣管中發(fā)現(xiàn)球囊菌的菌絲。

4 防治方法

無論是哪一種疾病，自從人類發(fā)現(xiàn)它以后，就開始了尋找治療這種疾病的方法,白堊病也不例外。自從1911年發(fā)現(xiàn)了白堊病以后，國內(nèi)外很多科研人員進(jìn)行了大量的研究工作，查閱白堊病方面的資料，就會發(fā)現(xiàn)，對于防治這種蜜蜂疾病的文章是非常多的，科學(xué)家們試圖從各個方面來治愈它，但是到目前為止，世界上任何一個國家都沒有研制出治療白堊病的特效藥物，但這沒有阻止科研人員的研究熱情，因為當(dāng)今有很多人仍然在研究這種疾病。

4.1 預(yù)防方面

蜜蜂白堊病是通過蜂球囊菌的孢子傳播,傳播的媒介廣泛[22],污染的飼料如花粉[23]等與蜂具等都是傳播的主要媒介。蜂球囊菌孢子也能在土壤,污水、雜草等處生存,以不同的方式進(jìn)入蜂群內(nèi);而且蜂球囊菌的孢子抗逆性強(qiáng)。因此,蜜蜂白堊病要堅持防與治相結(jié)合,做到無病先防,有病早治,重點(diǎn)放在切斷傳染源,提高蜂群抗病能力上,做到綜合防治。在這方面其實主要就是加強(qiáng)蜂群的管理[24]，把白堊病阻止在蜂群之外，破壞它的生存環(huán)境。

加強(qiáng)對蜂群的綜合飼養(yǎng)管理,創(chuàng)造有利于蜂的抗病力,控制真菌繁殖的環(huán)境條件,增加蜂群的群勢,采取保持足夠的緊脾蜜蜂。實行定地飼養(yǎng)、適當(dāng)與小轉(zhuǎn)地飼養(yǎng)相結(jié)合、喂獎勵飼料,飼料要嚴(yán)格保持清潔衛(wèi)生,可以65℃ 8h或者70℃ 2h水浴處理[25]，并適當(dāng)加入3%檸檬酸鈉助消化,箱內(nèi)保持一定蜂膠,更換患病群的蜂王和患病蜂具等。

近幾年蜜蜂抗白堊病育種研究較多[26]，有研究發(fā)現(xiàn), 蜜蜂白堊病的抗病機(jī)制具有遺傳性,不同的蜂種擁有不同的抗病力[27]，可以通過適當(dāng)?shù)挠N技術(shù)加以控制,這就是蜜蜂的清巢行為現(xiàn)象。工蜂咬掉死亡的幼蟲房蓋及消除死幼蟲, 有這種清巢行為的蜂群對白堊病具有抗性, 不會發(fā)病; 無此行為的蜂群, 為易感蜂群, 則會患有不同程度的白堊病, 據(jù)此特性,就可以選育出抗白堊病的蜂種，然后應(yīng)用于生產(chǎn)實踐，以減少白堊病的發(fā)生，增加養(yǎng)蜂的經(jīng)濟(jì)效益。 徐家胃[28]，羅勤[29]等都進(jìn)行了抗白堊病蜂群的選育，他們發(fā)現(xiàn)培育出來的蜂群具有較好的抗白堊病的能力。

Keryn Wilkes & Dr. Ben Oldroyd對蜜蜂的衛(wèi)生行為[30]進(jìn)行了詳細(xì)的研究[31]。他們指出，在一些蜜蜂品系中，打開和移除已死亡和患病的幼蟲是一種可遺傳的行為。于是他們提出了在西方蜜蜂中直接影響這種行為的基因位點(diǎn)以及位點(diǎn)之間的相關(guān)性。如此以來，不僅可以深入了解蜜蜂的社會行為特性，而且也可以構(gòu)建一種鑒別衛(wèi)生行為血統(tǒng)的分子生物學(xué)方法，并直接用于商業(yè)領(lǐng)域。

4.2 治療方面

當(dāng)蜂群發(fā)生了白堊病以后，一般都需要使用藥物來進(jìn)行治療。很早以前都是使用化學(xué)藥物，但到了近代，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，很多科研人員也在嘗試使用其他藥物或方法[32]來治療白堊病[33]，如：多功能生物制劑、中草藥、天然植物提取液和從蜂蜜中分離的一些芽孢桿菌[34]等。

馮峰等應(yīng)用多功能生物制劑先后在北京、吉林、山東、云南、遼寧、新疆、河北等7個省、市、自治區(qū)的30個蜂場預(yù)防和治療白堊病蜂群共1727群。防治效果達(dá)83.3 %～100 % ,平均防治效果為97.4 % , 應(yīng)用該藥預(yù)防的蜂群未發(fā)生白堊病[35]。Martha A. Gilliam指出在蜂巢中，在儲存的食物中，在健康的蜜蜂機(jī)體上生活著的一些微生物，可以增強(qiáng)蜜蜂各個方面的生活能力。它們其中的一些微生物可以制造抗生素來使我們飼養(yǎng)的蜂群免受白堊病球囊菌的侵害[36]。

Dr Craig Davis and Wendy Ward研究了用天然物質(zhì)來治療白堊病。他們研究了49種天然的提取油，一種香蕉提取物和單一的月桂酸甘油酯。最后發(fā)現(xiàn)，尼泊爾的檸檬草油，檸檬香桉樹提取油，檸檬香茶樹提取油和新西蘭賣盧卡樹提取油的一種特殊成分對球囊菌具有較好的抑制作用[37]。F. J. Reynald et al對從蜂蜜中分離的需氧型抑制球囊菌孢子形成的細(xì)菌進(jìn)行了研究。其中，他們發(fā)現(xiàn)了10種對球囊菌有很好的抑制甚至殺滅作用的細(xì)菌品系。這些細(xì)菌主要是一些芽孢桿菌[38]。

5 討論

（1）在蜜蜂球囊菌的培養(yǎng)條件研究中，不同的人得到了不同的結(jié)果，如有報道稱孢子萌發(fā)的最佳溫度為20～25℃，而有的報道則是(31～35)±0.5℃。這種差異的產(chǎn)生可能是由于他們研究了球囊菌的不同變種或株系。

（2）就目前的研究現(xiàn)狀看，對蜜蜂白堊病的研究涉及到了它的各個方面，同時也應(yīng)用了很多的現(xiàn)代化研究手段，但是仍然不能將這種蜜蜂疾病治愈。同時我們也發(fā)現(xiàn)，蜜蜂白堊病僅發(fā)生于西方蜜蜂，而東方蜜蜂不發(fā)病，東方蜜蜂與西方蜜蜂在基礎(chǔ)生物學(xué)、生理生化、代謝等方面均存在較大的差異，而蜜蜂球囊菌卻是與蜜蜂生態(tài)位高度吻合的病原菌。據(jù)此，可以對東方蜜蜂為什么不發(fā)病的原因進(jìn)行深入的研究，也許可以找到抗病育種的突破口。

（3）蜜蜂是一種社會性昆蟲，侵染它的疾病的發(fā)生及其發(fā)展過程有其特殊性，不能用研究其它生物的一般方法簡單套用到蜜蜂疾病發(fā)生、流行的研究中，應(yīng)該根據(jù)蜜蜂個體和群體的生物學(xué)特性，制定詳細(xì)和科學(xué)的研究方案，白堊病的研究也是如此。

（4）對于蜜蜂白堊病，還是應(yīng)該以預(yù)防為主，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，特別是要加強(qiáng)蜜蜂的抗病育種，因為蜜蜂的抗病機(jī)制具有遺傳性，篩選抗病強(qiáng)的蜂種和蜂王，進(jìn)行定向選育，以培育出優(yōu)良種群，應(yīng)用于生產(chǎn)實踐，提高經(jīng)濟(jì)效益。當(dāng)然，也不能放棄治療白堊病藥物的研究，特別是中草藥的篩選。只有防治結(jié)合，才能徹底治愈蜜蜂白堊病。