專家對(duì)蜂膠非特異性免疫調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展
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本文綜述了國(guó)內(nèi)外蜂膠對(duì)非特異性免疫系統(tǒng)的作用及其機(jī)理的研究進(jìn)展，探討了蜂膠對(duì)非特異性免疫反應(yīng)中各種細(xì)胞以及相關(guān)免疫介質(zhì)的影響。研究結(jié)果表 明：蜂膠能有效提高巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞的活性，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌和免疫細(xì)胞的增殖，降低巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)。 蜂膠 具有復(fù)雜的化學(xué)含有和廣泛的生物學(xué)活性。近年來，有關(guān)蜂膠免疫調(diào)節(jié)、消炎和抗腫瘤等方面的研究引起了眾多學(xué)者的關(guān)注，蜂膠對(duì)免疫系統(tǒng)作用機(jī)理的體內(nèi)和體外 實(shí)驗(yàn)研究也取得了許多新的進(jìn)展。免疫系統(tǒng)是各種器官、組織、細(xì)胞和機(jī)體分子等構(gòu)成的一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)狀系統(tǒng)，其在廣義上分為特異性免疫系統(tǒng)和非特異性免疫系 統(tǒng)。非特異性免疫系統(tǒng)的細(xì)胞包括吞噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、血小板和自然殺傷細(xì)胞，其中吞噬細(xì)胞又包括兩個(gè)主要譜系-單核/巨噬細(xì)胞和多形核細(xì)胞。本文結(jié)合體內(nèi) 外實(shí)驗(yàn)，從細(xì)胞和分子水平就國(guó)內(nèi)外蜂膠對(duì)機(jī)體非特異性免疫的作用及其機(jī)理進(jìn)行了綜述。
1、蜂膠對(duì)巨噬細(xì)胞的影響
巨噬細(xì)胞不僅是抗原遞呈細(xì)胞，而且是溶解病原體或腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞，在機(jī)體免疫反應(yīng)中具有重大作用。巨噬細(xì)胞含溶酶體可分泌大量重要的炎癥和免疫應(yīng)答物質(zhì)，包括多種酶、反應(yīng)氧、 反應(yīng)氮、細(xì)胞因子抑制劑、細(xì)胞因子、補(bǔ)體等。在過去的十多年，越來越多的研究證明蜂膠具有活化巨噬細(xì)胞、調(diào)節(jié)其吞噬功能以及細(xì)胞因子、補(bǔ)體、反應(yīng)氧和反應(yīng) 氮的產(chǎn)生等功能，從而影響巨噬細(xì)胞在抗微生物、抗腫瘤、抗炎等方面的反應(yīng)。
蜂膠的標(biāo)準(zhǔn)化在蜂膠研究中十分重要，但是蜂膠化學(xué)含有的高度多樣化增加 了這一問題的解決難度。在試驗(yàn)設(shè)計(jì)中，體外或體內(nèi)試驗(yàn)的選擇和蜂膠提取溶劑、給制劑劑量、給制劑周期和給制劑途徑等的確定都是不可或缺的因素。表1列出了蜂膠在 不同制劑物劑量、化學(xué)組成在體外實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)巨噬細(xì)胞影響的研究結(jié)果。
表1 蜂膠對(duì)巨噬細(xì)胞的影響
注：上升：促進(jìn)作用；下降：抑制作用；GC：氣相色譜法；GC-MS：氣相色譜-質(zhì)譜法；TLC：薄層色譜法；HPLC：高效液相色譜法
1.1巨噬細(xì)胞與活性氮
NOS 作用下L-精氨酸所釋放的NO是巨噬細(xì)胞活化標(biāo)志之一。NO是巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞、抗細(xì)菌、真菌以及寄生蟲等感染的炎癥反應(yīng)的重要因子、具有調(diào)節(jié) Th1-Th2平衡、抑制DNA合成、線粒體呼吸和真菌及細(xì)菌膜內(nèi)主動(dòng)運(yùn)輸?shù)裙δ堋Ａ硗?，NO也是重要的神經(jīng)遞質(zhì)、血管舒張劑和組織修復(fù)細(xì)胞介質(zhì)。然 而，NO也能以劑量、時(shí)間和部位依賴方式引起細(xì)胞毒性作用，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，損傷機(jī)體組織等。
Moriyasu等研究發(fā)現(xiàn)0.2-1.0mg/ml的蜂膠能抑制受LPS刺激的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO。Hu等研究了蜂膠水提液和蜂膠醇提液對(duì)鼠類急性炎癥的影響，證明這兩種提取液均能抑制NO的產(chǎn)生。Krol等指出這種作用來源于黃酮類化合物（10-50μm）。
蜂膠對(duì)NO的作用呈劑量依賴性。Orsi等研究了蜂膠醇提取液對(duì)巨噬細(xì)胞活性的影響，小鼠給予蜂膠24h后進(jìn)行體外細(xì)胞測(cè)定，結(jié)果顯示：濃度為 5，10，20μg/ml蜂膠對(duì)NO沒有顯著影響，濃度為50，100μg/ml的蜂膠對(duì)NO產(chǎn)生抑制作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，250，500，1000μg /ml蜂膠對(duì)NO產(chǎn)生促進(jìn)作用，3000和6000μg/ml蜂膠則產(chǎn)生抑制作用。Than等研究了巴西綠蜂膠的水提物和醇提物抑制小鼠巨噬細(xì)胞 J774.1產(chǎn)生NO的作用（培養(yǎng)基中包含LPS10μg/ml），結(jié)果顯示蜂膠水提物和醇提物都能有效抑制NO合成，且其作用效果受劑量影響。IC50 值分別為37.8，78.9μg/ml。
NO的產(chǎn)生受細(xì)胞因子、免疫細(xì)胞、細(xì)菌產(chǎn)物、腫瘤細(xì)胞以及內(nèi)毒素等眾多因素的影響，蜂膠對(duì)NO的抑制作用則主要是通過細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用得以實(shí)現(xiàn)，但是具體機(jī)理目前尚未得到完善的闡述。本文從已經(jīng)得到較多研究的以下的兩個(gè)方面來闡述蜂膠對(duì)NO的抑制作用機(jī)理：
（1）TGF-β1是最著名的NOS2所表達(dá)的內(nèi)源性抑制劑，它使NOS2的mRNA穩(wěn)定性下降，NOS2蛋白質(zhì)的合成減慢而分解加快。在T細(xì)胞或者外周單核血細(xì)胞的培養(yǎng)液中添加蜂膠之后，其上清液中的TGF-β1濃度增加，證明了蜂膠對(duì)NO的抑制作用。
（2）IFN- γ是激活巨噬細(xì)胞的重要細(xì)胞因子，IFN誘導(dǎo)基因編碼的轉(zhuǎn)錄酶以產(chǎn)生活性酶；IFN與LPS結(jié)合后處理小鼠的巨噬細(xì)胞，這些細(xì)胞表達(dá)大量的NOS。LEO 等對(duì)結(jié)腸炎大鼠（PG-PS誘導(dǎo)）腹腔注射30mg/kg的蜂膠1周，結(jié)果顯示CAPE降低大鼠結(jié)腸NF-kB水平和IFN-γ結(jié)合誘導(dǎo)的NO含量的增 多，并指出其作用機(jī)理-CAPE通過作用于iNOS（誘導(dǎo)性NOS）啟動(dòng)子中的NF-kB位點(diǎn)，或者通過直接抑制具有催化活性的i-NOS的活性，從而抑 制iNOS基因的轉(zhuǎn)錄。
1.2巨噬細(xì)胞與活性氧
機(jī)體經(jīng)常會(huì)產(chǎn)生超氧化物自由基等代謝產(chǎn)物，自由基在細(xì)胞膜脂質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)蛋白或DNA中十分 活躍，可對(duì)機(jī)體造成損傷，而細(xì)胞內(nèi)存在清除自由基的體系，以保護(hù)細(xì)胞。正常生理狀態(tài)下，氧自由基和氧抑制劑處于動(dòng)態(tài)平衡。吞噬細(xì)胞產(chǎn)生的氧化劑不僅會(huì)破壞 被吞噬的微生物也會(huì)破壞重要的活性分子，它們也存在于與炎癥疾病相關(guān)的受損組織中。
Orsi等研究了蜂膠醇提液對(duì)巨噬細(xì)胞活性的影響，小鼠給予蜂膠24h后進(jìn)行體內(nèi)外的細(xì)胞測(cè)定，結(jié)果顯示蜂膠（5，10，20μg/ml）能促進(jìn)雙氧水的 產(chǎn)生。體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示，250，500μg/ml蜂膠能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對(duì)IFN-γ的反應(yīng)性能，促進(jìn)雙氧水的釋放；與IFN-γ活化組相比較，經(jīng) 1000，3000和6000μg/ml蜂膠處理和IFN-γ活化的巨噬細(xì)胞雙氧水的釋放受到顯著抑制。
李云峰等在體外條件下研究槲皮素（20-80μmol/L）對(duì)巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激（LPS誘導(dǎo)氧化應(yīng)激）的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與LPS對(duì)照組比較，添加槲皮素 組上清液抗氧化力升高、NO濃度下降，細(xì)胞ROS含量、NOS活性及MDA水平下降。試驗(yàn)證明一定濃度的槲皮素可增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的抗氧化能力和吞噬能 力，并降低氧化應(yīng)激反應(yīng)。
1.3巨噬細(xì)胞與細(xì)胞因子
活化的巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子、酶、補(bǔ)體系統(tǒng)分子和促凝血?jiǎng)＞奘杉?xì)胞可以通過促炎癥性細(xì)胞因子促進(jìn)炎癥反應(yīng)，招募其他細(xì)胞，調(diào)節(jié)其活力并誘導(dǎo)黏附；也可以釋放抑制性分子抑制炎癥、免疫應(yīng)答和T細(xì)胞的增殖。
Leo等對(duì)結(jié)腸炎大鼠（PG-PS誘導(dǎo)）腹腔注射30mg/kg的蜂膠1周，結(jié)果顯示蜂膠降低大鼠結(jié)腸NF-kB水平和細(xì)胞因子（IFN-γ，IL- 1β）水平，顯著減輕結(jié)腸損傷。體外研究發(fā)現(xiàn)，CAPE可以抑制巨噬細(xì)胞（NR8383）產(chǎn)生NF-kB和TNF-α，顯著促進(jìn)DNA斷裂；在結(jié)腸上皮細(xì) 胞（SW620）的研究中也得到類似結(jié)果。說明CAPE通過抑制NF-kB而降低促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生以及減少巨噬細(xì)胞的凋亡。研究者還指出這一作用機(jī)理 很可能與CAPE對(duì)PG-PE誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的減弱作用相關(guān)。
Khayyal等以13%的蜂膠水提液作為輕度哮喘病人階段佐劑，給制劑2個(gè)月。在研究結(jié)束時(shí)，經(jīng)蜂膠階段的病人夜間發(fā)病的概率和嚴(yán)重程度明顯降低，呼吸功 能顯著改善，這與前列腺素、白細(xì)胞三烯和促炎細(xì)胞因子（TNF-α，IL-6,IL-8）的降低以及IL-10的提高相關(guān)。以慢性阻塞性肺疾病 （COPD）病人為研究對(duì)象得到了相似結(jié)果。經(jīng)過蜂膠輔助階段的病人肺泡巨噬細(xì)胞的NF-kB活性較COPD組顯著降低，IL-8分泌減少，說明蜂膠對(duì) COPD階段起一定作用。
細(xì)胞因子功能的行使是很復(fù)雜的，其中一個(gè)細(xì)胞因子的出現(xiàn)會(huì)影響若干個(gè)其他細(xì)胞因子的產(chǎn)生或者它們的反應(yīng)性。多種細(xì)胞因子相互影響，形成一個(gè)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)， 發(fā)揮多重生理功效。應(yīng)該說，蜂膠對(duì)細(xì)胞因子的作用也是多方面的，其主要是從整體出發(fā)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，從而作用于免疫系統(tǒng)以發(fā)揮其功能。
2、蜂膠對(duì)自然殺傷細(xì)胞（NK）的影響 NK細(xì)胞是不同于T、B細(xì)胞的淋巴細(xì)胞亞群，非黏著、非吞噬細(xì)胞，對(duì)一些腫瘤細(xì)胞核病毒感染細(xì)胞具溶解作用。NK細(xì)胞與特異免疫協(xié)同作用，可通過IgG受 體殺傷帶IgG的靶細(xì)胞；NK細(xì)胞激活之后釋放IFN-γ、IL-1、GM-CSF等細(xì)胞因子，在調(diào)節(jié)血細(xì)胞生產(chǎn)、免疫應(yīng)答中具有重要的作用。
Sforcin等指出以10%的蜂膠給制劑3天，NK細(xì)胞對(duì)鼠淋巴瘤（黑鼠瘤Yac-1細(xì)胞）的細(xì)胞毒性增強(qiáng)。這證實(shí)了以前的一個(gè)發(fā)現(xiàn)，即經(jīng)短期蜂膠給制劑之 后免疫系統(tǒng)相關(guān)效果好轉(zhuǎn)，免疫應(yīng)答作用提高。潘明研究了蜂膠提取物對(duì)荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)的影響，將S180肉瘤移植到BaIB/C純種小鼠，結(jié)果表明蜂膠提 取物對(duì)NK細(xì)胞殺傷活性有明顯增強(qiáng)作用，且顯著提高淋巴細(xì)胞增殖能力和IL-2的含量，說明蜂膠提取物能夠顯著提高荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)的活性。另有實(shí)驗(yàn)證明 蜂膠可以增強(qiáng)中老年大鼠的自然殺傷細(xì)胞活性和巨噬細(xì)胞吞噬功能，說明蜂膠可以提高中老年大鼠的免疫力。
在NK研究中酶發(fā)現(xiàn)季節(jié)因素對(duì)蜂膠的影響。NK細(xì)胞受細(xì)胞因子調(diào)控，如IFN（α、β、γ）、TNF-α、TGF-β1、IL-1β、IL-2、IL- 4、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-21、IL-23、，但是蜂膠激活這些細(xì)胞的機(jī)制目前尚不清楚?？赡苁?/span>蜂膠激活巨噬細(xì)胞，使 其產(chǎn)生如YNF-α、IL-12之類的細(xì)胞因子，它們作用于NK細(xì)胞，從而提高其細(xì)胞毒性。
3、蜂膠對(duì)多形核粒細(xì)胞的影響 多形核粒細(xì)胞可分為中性粒細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞。其中中性粒細(xì)胞的數(shù)量最多，是血液白細(xì)胞的主要含有。粒細(xì)胞不表現(xiàn)對(duì)抗原的固有特異性，但通常與抗體和補(bǔ)體協(xié)同而作用于微生物的急性炎癥，它們的主要作用是吞噬和殺滅病原體。
Chu研究了鯉魚抗嗜水氣單孢菌疫苗以蜂膠做佐劑的功效，結(jié)果表明與無佐劑的疫苗處理組以及未接種疫苗組相比較，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的白細(xì)胞活性增強(qiáng)，吞噬細(xì)胞數(shù)目增多，血清中抗嗜水氣單孢菌的抗體增多。 通過蜂膠（65，325mg/kg）對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)的哮喘動(dòng)物模型的作用研究，發(fā)現(xiàn)蜂膠可抑制模型大鼠血清中抗卵清蛋白的IgE和IgG1水平和氣管高反 應(yīng)性水平，支氣管肺泡灌洗液中嗜酸細(xì)胞活化趨化因子濃度和嗜酸粒細(xì)胞數(shù)量則無明顯改變。蜂膠組大鼠脾細(xì)胞中IFN-γ、IL-6和IL-10等細(xì)胞因子水 平低于對(duì)照組，經(jīng)ConA刺激之后的脾細(xì)胞IL-10的分泌收到強(qiáng)烈抑制，IFN-γ的分泌增多。另有學(xué)者以CAPE進(jìn)行了類似研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn) CAPE（10mg/kg）能明顯降低動(dòng)物模型的哮喘反應(yīng)，如肺附近血管和氣管中炎癥細(xì)胞的涌入，氣管腔窄化；氣管高反應(yīng)性的發(fā)展；支氣管肺泡灌洗液 TNF-α和Th2細(xì)胞因子（包括IL-4，IL-5）的產(chǎn)生和血清中特異性IgE的產(chǎn)生。與前一實(shí)驗(yàn)不同的是，支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性細(xì)胞數(shù)量的增加 受到抑制。
4、結(jié)語 免疫應(yīng)答由各種細(xì)胞和它們分泌的可溶性分子所介導(dǎo)，并通過各種反饋而調(diào)節(jié)。各種免疫細(xì)胞與可溶性免疫介質(zhì)以及各種細(xì)胞因子之間相互刺激和制約，形成復(fù)雜的 免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)。蜂膠可以對(duì)非特異性免疫系統(tǒng)以及特異性免疫系統(tǒng)的多個(gè)環(huán)節(jié)多個(gè)途徑起作用。蜂膠能有效提高巨噬細(xì)胞的作用、吞噬能力和抗氧化能力，降低其氧 化應(yīng)激反應(yīng)，調(diào)節(jié)其細(xì)胞因子的分泌；增加自然殺傷細(xì)胞的活性；調(diào)節(jié)多形核粒細(xì)胞的活性，控制其增殖。蜂膠對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)主要呈劑量依賴性，然而還需展開 進(jìn)一步的研究以確定人體給制劑劑量和給制劑周期。盡管相關(guān)文獻(xiàn)提供了一些假設(shè)和解釋，但蜂膠對(duì)非特異性免疫系統(tǒng)的作用機(jī)制尚未得到完善的闡述，需要更多更深入 更全面的研究。同時(shí)，蜂膠的含有十分復(fù)雜，其功效是各個(gè)含有對(duì)機(jī)體協(xié)同作用的結(jié)果。所以，將蜂膠的生物學(xué)活性的研究與蜂膠功效含有的研究相結(jié)合，顯得尤為 重要。
1、蜂膠對(duì)巨噬細(xì)胞的影響
巨噬細(xì)胞不僅是抗原遞呈細(xì)胞，而且是溶解病原體或腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞，在機(jī)體免疫反應(yīng)中具有重大作用。巨噬細(xì)胞含溶酶體可分泌大量重要的炎癥和免疫應(yīng)答物質(zhì)，包括多種酶、反應(yīng)氧、 反應(yīng)氮、細(xì)胞因子抑制劑、細(xì)胞因子、補(bǔ)體等。在過去的十多年，越來越多的研究證明蜂膠具有活化巨噬細(xì)胞、調(diào)節(jié)其吞噬功能以及細(xì)胞因子、補(bǔ)體、反應(yīng)氧和反應(yīng) 氮的產(chǎn)生等功能，從而影響巨噬細(xì)胞在抗微生物、抗腫瘤、抗炎等方面的反應(yīng)。
蜂膠的標(biāo)準(zhǔn)化在蜂膠研究中十分重要，但是蜂膠化學(xué)含有的高度多樣化增加 了這一問題的解決難度。在試驗(yàn)設(shè)計(jì)中，體外或體內(nèi)試驗(yàn)的選擇和蜂膠提取溶劑、給制劑劑量、給制劑周期和給制劑途徑等的確定都是不可或缺的因素。表1列出了蜂膠在 不同制劑物劑量、化學(xué)組成在體外實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)巨噬細(xì)胞影響的研究結(jié)果。
表1 蜂膠對(duì)巨噬細(xì)胞的影響
| 免疫試驗(yàn) | 報(bào)告結(jié)果 |
劑量 |
主要活性含有 |
鑒定方法 |
研究者 |
| 補(bǔ)體系統(tǒng)的替代途徑和經(jīng)典途徑 | 下降 | 63-1000 μg/ml |
酚酸、酚酯、酚醇醛、酮、黃酮類、芪類、香豆素類 |
HPLC GC-MS |
Ivanovska等 |
| 巨噬細(xì)胞的擴(kuò)展和活性 | 上升 |
10-5M | 5-咖啡鞣酸、咖啡鞣酸、4-咖啡鞣酸、4，6-二咖啡?？鼘幩? |
HPLC |
Tatefuji等 |
| 巨噬細(xì)胞活性 | 雙氧水（上升）；一氧化氮（下降）；IFN-γ（向上） |
2.5-100μg/ml |
異戊二烯-p-香豆酸苯并吡喃、揮發(fā)油、雙萜類、三萜類 |
TLC、GC、GC-MS |
Orai等 |
1.1巨噬細(xì)胞與活性氮
NOS 作用下L-精氨酸所釋放的NO是巨噬細(xì)胞活化標(biāo)志之一。NO是巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞、抗細(xì)菌、真菌以及寄生蟲等感染的炎癥反應(yīng)的重要因子、具有調(diào)節(jié) Th1-Th2平衡、抑制DNA合成、線粒體呼吸和真菌及細(xì)菌膜內(nèi)主動(dòng)運(yùn)輸?shù)裙δ堋Ａ硗?，NO也是重要的神經(jīng)遞質(zhì)、血管舒張劑和組織修復(fù)細(xì)胞介質(zhì)。然 而，NO也能以劑量、時(shí)間和部位依賴方式引起細(xì)胞毒性作用，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，損傷機(jī)體組織等。
Moriyasu等研究發(fā)現(xiàn)0.2-1.0mg/ml的蜂膠能抑制受LPS刺激的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO。Hu等研究了蜂膠水提液和蜂膠醇提液對(duì)鼠類急性炎癥的影響，證明這兩種提取液均能抑制NO的產(chǎn)生。Krol等指出這種作用來源于黃酮類化合物（10-50μm）。
蜂膠對(duì)NO的作用呈劑量依賴性。Orsi等研究了蜂膠醇提取液對(duì)巨噬細(xì)胞活性的影響，小鼠給予蜂膠24h后進(jìn)行體外細(xì)胞測(cè)定，結(jié)果顯示：濃度為 5，10，20μg/ml蜂膠對(duì)NO沒有顯著影響，濃度為50，100μg/ml的蜂膠對(duì)NO產(chǎn)生抑制作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，250，500，1000μg /ml蜂膠對(duì)NO產(chǎn)生促進(jìn)作用，3000和6000μg/ml蜂膠則產(chǎn)生抑制作用。Than等研究了巴西綠蜂膠的水提物和醇提物抑制小鼠巨噬細(xì)胞 J774.1產(chǎn)生NO的作用（培養(yǎng)基中包含LPS10μg/ml），結(jié)果顯示蜂膠水提物和醇提物都能有效抑制NO合成，且其作用效果受劑量影響。IC50 值分別為37.8，78.9μg/ml。
NO的產(chǎn)生受細(xì)胞因子、免疫細(xì)胞、細(xì)菌產(chǎn)物、腫瘤細(xì)胞以及內(nèi)毒素等眾多因素的影響，蜂膠對(duì)NO的抑制作用則主要是通過細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用得以實(shí)現(xiàn)，但是具體機(jī)理目前尚未得到完善的闡述。本文從已經(jīng)得到較多研究的以下的兩個(gè)方面來闡述蜂膠對(duì)NO的抑制作用機(jī)理：
（1）TGF-β1是最著名的NOS2所表達(dá)的內(nèi)源性抑制劑，它使NOS2的mRNA穩(wěn)定性下降，NOS2蛋白質(zhì)的合成減慢而分解加快。在T細(xì)胞或者外周單核血細(xì)胞的培養(yǎng)液中添加蜂膠之后，其上清液中的TGF-β1濃度增加，證明了蜂膠對(duì)NO的抑制作用。
（2）IFN- γ是激活巨噬細(xì)胞的重要細(xì)胞因子，IFN誘導(dǎo)基因編碼的轉(zhuǎn)錄酶以產(chǎn)生活性酶；IFN與LPS結(jié)合后處理小鼠的巨噬細(xì)胞，這些細(xì)胞表達(dá)大量的NOS。LEO 等對(duì)結(jié)腸炎大鼠（PG-PS誘導(dǎo)）腹腔注射30mg/kg的蜂膠1周，結(jié)果顯示CAPE降低大鼠結(jié)腸NF-kB水平和IFN-γ結(jié)合誘導(dǎo)的NO含量的增 多，并指出其作用機(jī)理-CAPE通過作用于iNOS（誘導(dǎo)性NOS）啟動(dòng)子中的NF-kB位點(diǎn)，或者通過直接抑制具有催化活性的i-NOS的活性，從而抑 制iNOS基因的轉(zhuǎn)錄。
1.2巨噬細(xì)胞與活性氧
機(jī)體經(jīng)常會(huì)產(chǎn)生超氧化物自由基等代謝產(chǎn)物，自由基在細(xì)胞膜脂質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)蛋白或DNA中十分 活躍，可對(duì)機(jī)體造成損傷，而細(xì)胞內(nèi)存在清除自由基的體系，以保護(hù)細(xì)胞。正常生理狀態(tài)下，氧自由基和氧抑制劑處于動(dòng)態(tài)平衡。吞噬細(xì)胞產(chǎn)生的氧化劑不僅會(huì)破壞 被吞噬的微生物也會(huì)破壞重要的活性分子，它們也存在于與炎癥疾病相關(guān)的受損組織中。
Orsi等研究了蜂膠醇提液對(duì)巨噬細(xì)胞活性的影響，小鼠給予蜂膠24h后進(jìn)行體內(nèi)外的細(xì)胞測(cè)定，結(jié)果顯示蜂膠（5，10，20μg/ml）能促進(jìn)雙氧水的 產(chǎn)生。體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示，250，500μg/ml蜂膠能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對(duì)IFN-γ的反應(yīng)性能，促進(jìn)雙氧水的釋放；與IFN-γ活化組相比較，經(jīng) 1000，3000和6000μg/ml蜂膠處理和IFN-γ活化的巨噬細(xì)胞雙氧水的釋放受到顯著抑制。
李云峰等在體外條件下研究槲皮素（20-80μmol/L）對(duì)巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激（LPS誘導(dǎo)氧化應(yīng)激）的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與LPS對(duì)照組比較，添加槲皮素 組上清液抗氧化力升高、NO濃度下降，細(xì)胞ROS含量、NOS活性及MDA水平下降。試驗(yàn)證明一定濃度的槲皮素可增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的抗氧化能力和吞噬能 力，并降低氧化應(yīng)激反應(yīng)。
1.3巨噬細(xì)胞與細(xì)胞因子
活化的巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子、酶、補(bǔ)體系統(tǒng)分子和促凝血?jiǎng)＞奘杉?xì)胞可以通過促炎癥性細(xì)胞因子促進(jìn)炎癥反應(yīng)，招募其他細(xì)胞，調(diào)節(jié)其活力并誘導(dǎo)黏附；也可以釋放抑制性分子抑制炎癥、免疫應(yīng)答和T細(xì)胞的增殖。
Leo等對(duì)結(jié)腸炎大鼠（PG-PS誘導(dǎo)）腹腔注射30mg/kg的蜂膠1周，結(jié)果顯示蜂膠降低大鼠結(jié)腸NF-kB水平和細(xì)胞因子（IFN-γ，IL- 1β）水平，顯著減輕結(jié)腸損傷。體外研究發(fā)現(xiàn)，CAPE可以抑制巨噬細(xì)胞（NR8383）產(chǎn)生NF-kB和TNF-α，顯著促進(jìn)DNA斷裂；在結(jié)腸上皮細(xì) 胞（SW620）的研究中也得到類似結(jié)果。說明CAPE通過抑制NF-kB而降低促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生以及減少巨噬細(xì)胞的凋亡。研究者還指出這一作用機(jī)理 很可能與CAPE對(duì)PG-PE誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的減弱作用相關(guān)。
Khayyal等以13%的蜂膠水提液作為輕度哮喘病人階段佐劑，給制劑2個(gè)月。在研究結(jié)束時(shí)，經(jīng)蜂膠階段的病人夜間發(fā)病的概率和嚴(yán)重程度明顯降低，呼吸功 能顯著改善，這與前列腺素、白細(xì)胞三烯和促炎細(xì)胞因子（TNF-α，IL-6,IL-8）的降低以及IL-10的提高相關(guān)。以慢性阻塞性肺疾病 （COPD）病人為研究對(duì)象得到了相似結(jié)果。經(jīng)過蜂膠輔助階段的病人肺泡巨噬細(xì)胞的NF-kB活性較COPD組顯著降低，IL-8分泌減少，說明蜂膠對(duì) COPD階段起一定作用。
細(xì)胞因子功能的行使是很復(fù)雜的，其中一個(gè)細(xì)胞因子的出現(xiàn)會(huì)影響若干個(gè)其他細(xì)胞因子的產(chǎn)生或者它們的反應(yīng)性。多種細(xì)胞因子相互影響，形成一個(gè)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)， 發(fā)揮多重生理功效。應(yīng)該說，蜂膠對(duì)細(xì)胞因子的作用也是多方面的，其主要是從整體出發(fā)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，從而作用于免疫系統(tǒng)以發(fā)揮其功能。
2、蜂膠對(duì)自然殺傷細(xì)胞（NK）的影響 NK細(xì)胞是不同于T、B細(xì)胞的淋巴細(xì)胞亞群，非黏著、非吞噬細(xì)胞，對(duì)一些腫瘤細(xì)胞核病毒感染細(xì)胞具溶解作用。NK細(xì)胞與特異免疫協(xié)同作用，可通過IgG受 體殺傷帶IgG的靶細(xì)胞；NK細(xì)胞激活之后釋放IFN-γ、IL-1、GM-CSF等細(xì)胞因子，在調(diào)節(jié)血細(xì)胞生產(chǎn)、免疫應(yīng)答中具有重要的作用。
Sforcin等指出以10%的蜂膠給制劑3天，NK細(xì)胞對(duì)鼠淋巴瘤（黑鼠瘤Yac-1細(xì)胞）的細(xì)胞毒性增強(qiáng)。這證實(shí)了以前的一個(gè)發(fā)現(xiàn)，即經(jīng)短期蜂膠給制劑之 后免疫系統(tǒng)相關(guān)效果好轉(zhuǎn)，免疫應(yīng)答作用提高。潘明研究了蜂膠提取物對(duì)荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)的影響，將S180肉瘤移植到BaIB/C純種小鼠，結(jié)果表明蜂膠提 取物對(duì)NK細(xì)胞殺傷活性有明顯增強(qiáng)作用，且顯著提高淋巴細(xì)胞增殖能力和IL-2的含量，說明蜂膠提取物能夠顯著提高荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)的活性。另有實(shí)驗(yàn)證明 蜂膠可以增強(qiáng)中老年大鼠的自然殺傷細(xì)胞活性和巨噬細(xì)胞吞噬功能，說明蜂膠可以提高中老年大鼠的免疫力。
在NK研究中酶發(fā)現(xiàn)季節(jié)因素對(duì)蜂膠的影響。NK細(xì)胞受細(xì)胞因子調(diào)控，如IFN（α、β、γ）、TNF-α、TGF-β1、IL-1β、IL-2、IL- 4、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-21、IL-23、，但是蜂膠激活這些細(xì)胞的機(jī)制目前尚不清楚?？赡苁?/span>蜂膠激活巨噬細(xì)胞，使 其產(chǎn)生如YNF-α、IL-12之類的細(xì)胞因子，它們作用于NK細(xì)胞，從而提高其細(xì)胞毒性。
3、蜂膠對(duì)多形核粒細(xì)胞的影響 多形核粒細(xì)胞可分為中性粒細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞。其中中性粒細(xì)胞的數(shù)量最多，是血液白細(xì)胞的主要含有。粒細(xì)胞不表現(xiàn)對(duì)抗原的固有特異性，但通常與抗體和補(bǔ)體協(xié)同而作用于微生物的急性炎癥，它們的主要作用是吞噬和殺滅病原體。
Chu研究了鯉魚抗嗜水氣單孢菌疫苗以蜂膠做佐劑的功效，結(jié)果表明與無佐劑的疫苗處理組以及未接種疫苗組相比較，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的白細(xì)胞活性增強(qiáng)，吞噬細(xì)胞數(shù)目增多，血清中抗嗜水氣單孢菌的抗體增多。 通過蜂膠（65，325mg/kg）對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)的哮喘動(dòng)物模型的作用研究，發(fā)現(xiàn)蜂膠可抑制模型大鼠血清中抗卵清蛋白的IgE和IgG1水平和氣管高反 應(yīng)性水平，支氣管肺泡灌洗液中嗜酸細(xì)胞活化趨化因子濃度和嗜酸粒細(xì)胞數(shù)量則無明顯改變。蜂膠組大鼠脾細(xì)胞中IFN-γ、IL-6和IL-10等細(xì)胞因子水 平低于對(duì)照組，經(jīng)ConA刺激之后的脾細(xì)胞IL-10的分泌收到強(qiáng)烈抑制，IFN-γ的分泌增多。另有學(xué)者以CAPE進(jìn)行了類似研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn) CAPE（10mg/kg）能明顯降低動(dòng)物模型的哮喘反應(yīng)，如肺附近血管和氣管中炎癥細(xì)胞的涌入，氣管腔窄化；氣管高反應(yīng)性的發(fā)展；支氣管肺泡灌洗液 TNF-α和Th2細(xì)胞因子（包括IL-4，IL-5）的產(chǎn)生和血清中特異性IgE的產(chǎn)生。與前一實(shí)驗(yàn)不同的是，支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性細(xì)胞數(shù)量的增加 受到抑制。
4、結(jié)語 免疫應(yīng)答由各種細(xì)胞和它們分泌的可溶性分子所介導(dǎo)，并通過各種反饋而調(diào)節(jié)。各種免疫細(xì)胞與可溶性免疫介質(zhì)以及各種細(xì)胞因子之間相互刺激和制約，形成復(fù)雜的 免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)。蜂膠可以對(duì)非特異性免疫系統(tǒng)以及特異性免疫系統(tǒng)的多個(gè)環(huán)節(jié)多個(gè)途徑起作用。蜂膠能有效提高巨噬細(xì)胞的作用、吞噬能力和抗氧化能力，降低其氧 化應(yīng)激反應(yīng)，調(diào)節(jié)其細(xì)胞因子的分泌；增加自然殺傷細(xì)胞的活性；調(diào)節(jié)多形核粒細(xì)胞的活性，控制其增殖。蜂膠對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)主要呈劑量依賴性，然而還需展開 進(jìn)一步的研究以確定人體給制劑劑量和給制劑周期。盡管相關(guān)文獻(xiàn)提供了一些假設(shè)和解釋，但蜂膠對(duì)非特異性免疫系統(tǒng)的作用機(jī)制尚未得到完善的闡述，需要更多更深入 更全面的研究。同時(shí)，蜂膠的含有十分復(fù)雜，其功效是各個(gè)含有對(duì)機(jī)體協(xié)同作用的結(jié)果。所以，將蜂膠的生物學(xué)活性的研究與蜂膠功效含有的研究相結(jié)合，顯得尤為 重要。
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